Development of a gnotobiotic growth system model for Dicentrarchus labrax larvae: = desenvolvimento de um sistema modelo de crescimento gnotobiótico para larvas de Dicentrarchus labrax
Dissertação mest., Biologia Marinha, Universidade do Algarve, 2007Compostos quimioterapeutas e desinfectantes antimicrobianos, têm sido usados para controlo do
ambiente microbiano aquático. Porém, esta prática, promoveu o surgimento e proliferação de estirpes
bacterianas resistentes a antibióticos, nos organismos aquáticos e instalações de cultivo, reduziu a
eficácia do controlo profilático, transmitiu aos humanos patógenos resistentes e causou impactos
ambientais adversos.
O emprego de estirpes bacterianas probióticas, é uma alternativa profilática para controlo
microbacteriano. Embora a importância do controlo seja reconhecida, o papel e modo de actuação das
estirpes probióticas requerem mais estudos. Um melhor reconhecimento dos mecanismos nas relações
hospedeiro-microorganismo é essencial ao desenvolvimento de soluções alternativas para controlo de
patologias na indústria da aquacultura.
Uma estratégia coerente, apreciará o desempenho dos organismos cultivados em condições
axénicas, avaliando posteriormente o efeito induzido pelas estirpes suplementares. Um sistema de
cultivo gnotobiótico, que promova as condições-chave para avaliação de estirpes diversas, é
fundamental. O robalo, Dicentrarchus labrax, economicamente das espécies marinhas mais
importantes na Europa, é o modelo perfeito para avaliar tais interacções.
Procurou-se conciliar a informação disponível com procedimentos mais recentes e eficazes,
estabelecendo um modelo padronizado para o cultivo de larvas gnotobióticas de D.labrax, em
circunstâncias as quais, no futuro, poderão ser relevantes à aquacultura industrial.
Com vista à obtenção de larvas axénicas, à chegada desinfectou-se a superfície dos ovos, sendo
parte das experiências planeadas para estudar o efeito dos protocolos de desinfecção na taxa de
eclosão e sobrevivência dos ovos.
A densidade bacteriana, baseada no número de colónias de crescimento em meios nutritivos
clássicos, após incubação do homogeneizado de ovos/larvas, foi utilizada na avaliação do efeito
bactericida dos diferentes tratamentos químicos e verificação do estado axénico, durante a eclosão e
desenvolvimento das larvas.
Novos dispositivos rotativos e dois regimes com suplementos de duas estirpes diferentes, foram
avaliados por análise das taxas de mortalidade/sobrevivência larvar. Embora os dispositivos rotativos
causem tensão nas larvas, são provavelmente o melhor meio para manter bactérias e células de
fermento em suspensão.
O sistema em desenvolvimento permitiu ajustar variáveis importantes, suportando uma eclosão em
ambiente axénico e manutenção eficaz das larvas em condições gnotobióticas durante 13 dias.
A desinfecção superficial com 100 mg.L-1 glutaraldeído durante 5 min, suplementada com
antibióticos (ampicilina e rifampicina, 10 mg.L-1 cada), foi eficaz na redução da carga microbiana,
melhorando significativamente as taxas de sobrevivência larvar, dos grupos em avaliação. Num
contexto geral, nenhuma diferença de maior, fora observada entre o padrão de desenvolvimento
morfológico dos indivíduos cultivados nos grupos de controle e desinfecção com glutaraldeído,
respectivamente.
Aeromonas hydrophila, leveduras de padeiro Saccharomyces cerevisiae (estirpe selvagem) e seu
mutante isogénico mnn9, agiram como estirpes microbianas neutras, sem influenciar o
desenvolvimento larvar durante os primeiros treze dias