The objective for this study was to evaluate two support and two of flask covers and the effect of sucrose on the in vitro rooting of M-9 apple rootstock. The culture medium used was MS, added of indole-3-butyric acid-IBA (5 µM). The treatments consisted of two support (agar or vermiculite); flask cover (cotton-wool or aluminum foil) and with or without addition of sucrose to the culture media. In culture medium with sucrose, it was observed higher rooting percentage with agar than that of vermiculite. The flasks covered with cotton-wool had higher average of root number per plantlet as well as higher rooting percentage in the culture medium with sucrose.Este trabalho teve como objetivo determinar o melhor material de suporte, tipo de vedação dos frascos e concentração de sacarose, visando o enraizamento in vitro do porta-enxerto de macieira M-9. O meio de cultura usado foi o MS, acrescido de ácido indolbutírico-AIB (5 mM). Os tratamentos consistiram-se no uso de dois tipos de material de suporte (ágar e vermiculita); vedação de frascos (algodão e papel alumínio) e da presença ou ausência de sacarose no meio de cultura. Constatou-se que o ágar promoveu o melhor desempenho para a percentagem de enraizamento, sendo superior à vermiculita em meio de cultivo com sacarose. A vedação dos frascos com algodão promoveu maior número médio de raízes e porcentagem de enraizamento em meio de cultivo com adição de sacarose
