Rosin, Giovana Flavia

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Lume 5.8

Evento Salão UFRGS 2019: SIC - XXXI SALÃO DE INICIAÇÃOCIENTÍFICA DA UFRGSAno 2019Local Campus do Vale - UFRGSTítulo Clonagem e identificação da localização subcelular doEuGene2 de Eugenia unifloraAutor GIOVANA FLAVIA ROSINOrientador MARCIA MARIA A NACHENVENG P MARGISClonagem e caracterização funcional do gene ​EuGene2 ​ de ​Eugenia uniflora   Giovana Flávia Rosin; Carolina da Silva Silveira; Fernanda Lazzarotto; Márcia Margis-Pinheiro Universidade Federal do Rio Grande do Sul   O estresse hídrico é um dos principais obstáculos para a produtividade de culturas de              interesse econômico. Devido às mudanças climáticas, foi previsto que as secas se tornem             ainda mais intensas e prevalentes nas próximas décadas, e que o aumento de temperatura              global resulte em maiores taxas de evapotranspiração​. Além disto, a irrigação corresponde a             cerca de 70% do consumo mundial de água, compondo um custo para a agricultura e um peso                 ambiental. Dentre os meios utilizadas para a obtenção de plantas mais tolerantes ao déficit              hídrico, a busca por recursos genéticos em espécies naturalmente adaptadas a condições            extremas é uma importante estratégia com aplicações biotecnológicas. Nesse contexto, a           espécie nativa brasileira Eugenia uniflora​, conhecida popularmente como pitangueira, é um           modelo de estudo promissor. A pitangueira está presente do Nordeste até o Sul do Brasil além                da Argentina, Uruguai e Paraguai, abrangendo os ecossistemas tropical, subtropical e           temperado. Dependendo das condições do ambiente, pode desenvolver-se como um arbusto           na restinga ou uma árvore de até 9 metros na mata ciliar. A plasticidade da espécie em                 diferentes ecossistemas motivou a busca por novos genes relacionados à adaptação destas            plantas a diferentes regimes hídricos. Para tal, foram coletadas amostras de folhas de plantas              naturais da restinga e da mata ciliar. Sementes destas plantas foram coletadas e             posteriormente germinadas em casa de vegetação, onde foram submetidas a condição de            déficit hídrico após seis meses de cultivo. Após análise do transcriptoma do material obtido,              foram selecionados 12 genes com potencial aplicação biotecnológica visando a obtenção de            plantas mais tolerantes ao estresse hídrico. O objetivo deste trabalho foi caracterizar um             destes genes, denominado ​EuGene2​, o qual possui 241 pb e não possui similaridade com              nenhum outro gene de outras espécies vegetais. As bibliotecas de cDNA geradas para o              sequenciamento foram utilizadas como molde para a amplificação da sequência codificadora           do gene através da técnica de PCR. O fragmento amplificado foi clonado em vetor de entrada                pENTR/D-TOPO, sendo a clonagem confirmada por meio de sequenciamento. Para a           identificação da localização subcelular da proteína EuGene2, foi realizada recombinação do           vetor de entrada com o vetor pART7-YFP. A construção final foi analisada por meio de PCR,                digestão com enzimas de restrição, e sequenciamento, além disso foi utilizada para a             transformação de protoplastos de ​Arabidopsis thaliana​, os quais foram analisados por           microscopia confocal. A partir das imagens obtidas, foi observada a localização subcelular da             proteína, aparentemente, no citoplasma destas células. Sendo os resultados deste ensaio           apenas iniciais, será necessário realizar um experimento de co-localização com marcadores a            fim de confirmar o que foi observado. Como perspectivas deste trabalho, a sequência             codificadora obtida será clonada em vetor binário de expressão a fim de obtermos plantas de               Arabidopsis thaliana superexpressando ​EuGene2​. Estas plantas serão desafiadas sob         diferentes regimes hídricos a fim de avaliarmos sua potencial aplicação biotecnológica.      

Clonagem e identificação da localização subcelular do EuGene2 de Eugenia uniflora

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