目的:通过谱效分析探讨雷公藤药材提取物高效液相色谱图中免疫抑制活性及肾毒性相关色谱峰,为确定雷公藤免疫抑制活性及毒性物质基础提供依据。方法:对8个产地雷公藤药材分别进行提取纯化,采用高效液相色谱法(HPLC)建立各产地雷公藤提取物的指纹图谱。利用密度梯度离心法分离新鲜人外周血单个核细胞(PBMC),给予凝集素(PHA)和脂多糖(LPS)共刺激造模,分为空白组、模型组(PHA+LPS)、雷公藤处理组。给予雷公藤处理48 h后检测上清中IFN-γ和IL-2的含量,并计算IC50值。以小鼠肾小球系膜细胞(GNM-SV40)为模型利用CCK8法考察雷公藤的肾毒性,计算IC50值。将各产地雷公藤的指纹图谱信息及免疫抑制药效、细胞毒性数据进行标准化处理后利用偏最小二乘法进行谱效关系分析。结果:免疫抑制药效试验中,雷公藤提取物可显著抑制PHA和LPS诱导PBMC免疫细胞因子IFN-γ和IL-2的分泌(P0.3);当以IL-2 IC50值为毒性指标时,1,8,3,5号峰为主要贡献峰(回归系数绝对值>0.3),16~29号峰为次要贡献峰(回归系数绝对值0.3),15~29号峰为次要贡献峰(回归系数绝对值0.3);peak 1,8,5 and3 contributed greatly to decrease of IL-2(absolute value of coefficient>0.3);peak1,8 and3 contributed greatly to toxicity on GNM-SV40 cells(absolute value of coefficient>0.3).CONCLUSION Immunosuppressive activity and toxicity of TWHF have the closest correlation with peak1,3 and 8in HPLC fingerprints.Peak2 and 5 are main effective peaks without toxicity.Peak 15-29 have certain effects on immunosuppressive activity and toxicity,but not significant.福建省自然科学基金项目(编号:2012I1001
