叶向群

吴春旭

左正宏

朱明贞

林友照

桂慕燕

羿红

陈元霖

Xiamen University Institutional Repository

蚕  业  科  学    CANYE KEXUE 2003; 29 ( 4)应用精子载体法导入外源 DNA影响家蚕遗传性的研究Study on Effect of External DNA Introduction bySperm Vector Method on Inheritance of the Silkworm, Bombyx mori  我们曾经实验表明, 无论采用直接注射幼虫方法, 还是采用精子介导的/交配囊法0, 将外源 DNA导入蓖麻蚕或家蚕体内, 都有可能改变受体的某些遗传特性, 有的变异还可以遗传并育成稳定的新品系。实验结果还表明,采用不同品种的家蚕 DNA 导入同一品种的蓖麻蚕体内,对遗传性有不同的影响。为了进一步探讨外源 DNA对家蚕的遗传作用,也为了进一步验证精子介导的转基因技术在蚕上实际应用的可行性, 本研究采用我们建立的/交配囊导入法0,将不同种属的蓖麻蚕和柞蚕 DNA 导入家蚕处女蛾交配囊内, 并与同种雄蛾交配, 获得受精卵, 观察由此受精卵发育的幼虫的性状特征, 对其基因组DNA进行 RAPD检测。同时还设立导入自身(受体)DNA的试验对照组和自交对照组。为了从分子水平上验证/交配囊导入法0技术的可行性,将带有绿色荧光蛋白(GFP)基因在家蚕中能表达的 pG350质粒 DNA导入处女蛾交配囊内, 在和同种雄蛾交配,获得受精卵,并从其 G0 和 G1 代的早期幼虫(蚁蚕)提取 DNA进行PCR检测和 Southernblot检测。实验结果表明, 注入蓖麻蚕或柞蚕 DNA的家蚕当代(D0) ,即由实验卵孵出的幼虫中,出现了变异个体;在正常情况下受体幼虫身上有斑纹,在变异个体身上斑纹消失表现为白蚕,变异性状能稳定地遗传,经5代繁育均未出现分离,已形成了新品系 BT981和BT982。在D1 和 D2代凡是导入外源 DNA, 包括导入受体自身 DNA的试验组内,都出现有卵色或卵滞育特性的变化, 但这种性状的变化没能在世代间稳定地传递。对新品系的 RAPD检测发现, 在 BT981的 D0 和D1代的扩增图谱中, 变异带 (包括供受体中没有出现的新带,缺失受体中所固有的扩增带,以及个别与供体相同的目的带)分别占总带数的 43% 和 16%,在试验对照组(D0)中,也出现 10%的变异带。分子验证试验表明, 在导入 GFP 基因的试验组G0代, PCR阳性率为 3517% ( 5/ 14) , G0 代检测 PCR为阳性个体, 在 G0 和 G1 代 Southern blot为阳性反应。所得的试验结果提示: ( 1)采用/交配囊导入法0以精子为载体转移外源基因技术,在家蚕是可行的;( 2)外源 DNA可能改变受体基因组的结构, 或干扰受体某些基因正常的表达调控, 从而引起表型的变化,这种现象在大多数情况下与传统意义上的/转化现象0不同,它是由于外源 DNA作用改变了某些基因的表达和调控, 或者使某些本来开启的基因关闭,如本实验中出现的幼虫斑纹消失, 个体由花蚕变为白蚕;或者使本来关闭的基因重新开启,如我们以前实验中出现的蓖麻蚕幼虫个体又由白蚕变为花蚕。由外源 DNA作用引起的表型改变虽然是随机的,但从某些性状变异的重演性(如蚕幼虫的斑纹,家蚕的卵色和滞育特性)来看, 似乎对基因组的影响存在/热点0。桂慕燕  叶向群  左正宏  吴春旭  陈元霖(厦门大学生命科学学院,厦门  361005)羿  红  朱明贞  林友照(福建省蚕桑科学研究所,福州  350003)454

Study on Effect of External DNA Introduction by Sperm Vector Method on Inheritance of the Silkworm,Bombyx mori

http://dspace.xmu.edu.cn/bitstream/handle/2288/154299/%e5%ba%94%e7%94%a8%e7%b2%be%e5%ad%90%e8%bd%bd%e4%bd%93%e6%b3%95%e5%af%bc%e5%85%a5%e5%a4%96%e6%ba%90DNA%e5%bd%b1%e5%93%8d%e5%ae%b6%e8%9a%95%e9%81%97%e4%bc%a0%e6%80%a7%e7%9a%84%e7%a0%94%e7%a9%b6.pdf?sequence=1&isAllowed=y

Study on Effect of External DNA Introduction by Sperm Vector Method on Inheritance of the Silkworm,Bombyx mori

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Xiamen University Institutional Repository