厦门大学固体表面物理化学国家重点实验室基金资助项

沈明山

胡涌刚

邵寒娟

陈睦传

CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY (CHINESE VERSION)

Xiamen University Institutional Repository

毛细管区带电泳法测定低卡路里食品中甜菊苷邵寒娟1 　胡涌刚 3 2 　沈明山1 　陈睦传1(厦门大学生物系1 ,化学系2 ,厦门 361005)　2001210201 收稿 ;2002204230 接受本文系厦门大学固体表面物理化学国家重点实验室基金资助项目1 　引 　　言当前 ,食用传统糖源已是造成肥胖、糖尿病以及心血管等疾病的重要原因之一。甜菊糖苷 (主要成分为 stevioside(St)和 rebaudioside A(RA) )作为高甜度低热能的理想甜味剂 ,广泛用于食品和医药行业。本文通过对甜菊苷标样中两种主要成分 St 和 RA 的分离分析 ,探讨了进样量、电压、柱温、缓冲液浓度以及 pH值等条件对其分离效果的影响 ,建立用毛细管电泳定量测定低卡路里食品中甜菊糖苷含量的快速、灵敏、高效的新方法。2 　实验部分2. 1 　仪器和试剂 　CE3000 型毛细管电泳仪 (Bio2Rad ,USA) ;毛细管 (Bio2Rad ,USA) :有效长度 4514 cm ,总长 50 cm ,内径 50μm的熔硅石英管 ;甜菊苷 (Sigma 公司) ,甲醇 (A. R. ,上海吴泾化工总厂) ,Tris(A. R. ,上海吴泾化工总厂) ,硼酸 (A. R. ,上海吴泾化工总厂) ,蒸馏水 ,川谷绿豆百合羹 (上海川崎食品公司) 。2. 2 　样品处理标准样品 St 和实际样品经甲醇∶60 mmol/ L Tris2硼酸 (1∶1 ,V/ V)溶解配制成所需要的浓度 ,实际样品浸泡过夜。3 　结果与讨论3. 1 　进样量的影响 　在 1～6 psi ×s 进样量范围内 ,标样中两种主要成分 St 和 RA 都能达到完全分离 ,且峰型对称性都较好。随着进样量的增加 ,St 和 RA 的信号强度逐渐增强。选择最佳进样量 2 psi ×s。3. 2 　柱温的影响 　随着柱温的升高 ,St 的出峰时间逐渐变短。在 15～40 ℃的温度范围内 ,标样中两种主要成分 St 和 RA均能达到完全分离。柱温从 15～30 ℃,St 的信号强度逐渐增强。在柱温 30～40 ℃的条件下 ,St 的信号强度基本保持不变。选择实验柱温为 30 ℃。3. 3 　工作电压的影响 　随着电压的增大 ,St 的出峰时间逐渐变短 ;St 的信号逐渐增强 ,但在电压为 30 kV 的条件下略有下降。本实验选择工作电压为 25 KV ,因为此条件下 St 和 RA 具有较短出峰时间 ,且具有最高的理论塔板数。314 　缓冲液浓度的影响 　随着缓冲液浓度的增加 ,St 的出峰时间逐渐延长 ,在 10～90 mmolΠL 的浓度范围内 ,标样中的两种主要成分都能达到完全分离。在 10～90 mmolΠL 的浓度范围内 ,St 的信号强度逐渐增强 ,且 St 和 RA 之间的分离度也逐渐增大 ,之后随缓冲液浓度的增加 ,St 的信号强度及 St 和 RA 之间的分离度都逐渐下降。浓度为 60 mmol/ L 的条件下信号强度较强 ,具有较佳分离度。3. 5 　缓冲液 pH值的影响 　St 的出峰时间随着缓冲液 pH值的增加而缩短。在 pH 值为 7. 0 的条件下 ,RA 基本无信号。在 pH 7. 0～8. 0 范围内 ,标样中两种主要成分的分离度逐渐增大 ,St 的信号强度也逐渐增强。在 pH 8. 5～1 0. 0 的范围内 ,St 和 RA 之间的分离度逐渐下降 ,SS的信号强度略有下降。在缓冲液 pH 7. 0～1 0. 0 范围内 ,St 和 RA 均能得到完全分离。缓冲液 pH值为 8. 0 的条件下 ,St 和 RA 之间的分离度最佳 ,信号强度较强 ,而出峰时间较短。3. 6 　线性范围优化条件下 ,标样中两种主要成分 St 和 RA 的出峰时间较短 ,在 4 min 内均实现各成分的分离 ,分离速度比现有的CE法提高了 4 倍。St 的理论塔板数可高达 1. 1～104 / m ,分离度比其他 CE法至少提高 10 倍。在此条件下我们对同一样品在 3 d 内共进行 15 次实验 (每天 5 次) ,发现 St 出峰时间 RSD < 0. 45 %。SS在 7. 45 ×10 - 5～1. 74 ×10 - 2 molΠL 的浓度范围内存在良好的线性关系。峰面积 ( A)与浓度 ( C)之间的线性回归方程为 : A = 36339 C + 4541. 6 ,相关系数为 0. 9994。3. 7 　实际样品的分离测定 　在优化条件下 ,我们测定了甜菊糖食品川谷绿豆百合羹的甜菊糖苷含量 ,可能是由于该食品中甜菊糖含量较低的缘故 ,在电泳图谱中我们没有发现 RA 峰的存在。实际样品与甜菊苷标样两者 St 出峰时间稍有差异 ,主要是因为实际样品中除甜菊糖苷外还存在较多的其他成分 ,直接影响了 St 的出峰时间。由标准工作曲线得其中 St 的含量为 0. 11 %。第 30 卷2002 年 9 月　　　　　　　　　　　　分析化学 (FENXI HUAXUE) 　来稿摘登Chinese Journal of Analytical Chemistry　　　　　　　　　　　　第 9 期1152

毛细管区带电泳法测定低卡路里食品中甜菊苷

http://dspace.xmu.edu.cn/bitstream/handle/2288/143413/%e6%af%9b%e7%bb%86%e7%ae%a1%e5%8c%ba%e5%b8%a6%e7%94%b5%e6%b3%b3%e6%b3%95%e6%b5%8b%e5%ae%9a%e4%bd%8e%e5%8d%a1%e8%b7%af%e9%87%8c%e9%a3%9f%e5%93%81%e4%b8%ad%e7%94%9c%e8%8f%8a%e8%8b%b7.pdf?sequence=1&isAllowed=y

毛细管区带电泳法测定低卡路里食品中甜菊苷

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