曹婉恒

王玲

Xiamen University Institutional Repository

●综述与讲座●肝炎疫苗的研究进展曹婉恒1 　王 　玲21 　厦门大学化学化工学院化学工程与生物工程系生物工程专业 2004 级本科生 ,福建省厦门市　361005 ;　2 　昆明医学院基础医学院微生物学与免疫学教研室关键词 　疫苗 　肝炎 　甲型 　乙型 　丙型 　戊型中图分类号 :R51216 　文献标识码 :A 　文章编号 :100127585 (2007) 0921025203　　病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起的世界性传染病 ,对世界公共卫生安全构成严重危害 ,更重要的是 ,丙型肝炎的慢性延转率及最终导致肝硬化和肝癌的比率高于乙型肝炎 ,从而成为全世界研究和防治的热点。目前仅有甲型肝炎和乙型肝炎有预防用疫苗 ,但免疫效果不理想 ;而丙型肝炎和戊型肝炎无正式疫苗上市 ,发展有效的预防、甚至治疗肝炎的疫苗 ,降低肝炎的感染率 ,阻止其流行 ,其社会经济效益是不言而喻的。本文对甲型肝炎病毒 ( HAV) 、乙型肝炎病毒 ( HBV) 、丙型肝炎病毒 ( HCV) 和戊型肝炎病毒 ( H EV)疫苗的研究进展作一综述。1 　甲型肝炎疫苗甲型肝炎减毒活疫苗有 H2 株或 L1 株[1 ] ,其是肌肉注射 ,儿童较难接受。龙润乡等[2 ] 利用可生物降解的材料聚乳酸/ 乙醇酸 ( PLA/ PL G)包裹甲型肝炎减毒活疫苗 , 制成微球型疫苗 , 可降低胃酸对抗原的直接破坏 ,有效提高口服免疫的效果。试验结果显示 ,微球免疫疫苗免疫恒河猴及加强免疫后产生的抗体主要是保护性抗体。与多数学者报道一致[3 ] ,口服免疫后肠道中的 SIgA 抗体水平高于HAV2Ig G , 采用恒河猴进行试验 , 其抗体反应水平与人体对疫苗的反应最为接近。2 　乙型肝炎疫苗2. 1 　DNA 疫苗 　DNA 疫苗就是将编码抗原的基因导入体内 ,细胞内表达抗原 ,诱导特异性体液和细胞免疫应答 ,进行预防和治疗疾病的一种分子生物学技术。传统上用于预防病毒性肝炎的疫苗为血源性疫苗和近几年来发展的基因工程疫苗。前者如未完全纯化 ,则有可能使接种者感染病毒性肝炎 ;而后者工艺复杂 ,难度大 ,成本高 ,运输不便 ,故而人们希望找到一种新的安全有效、制造简便、廉价的疫苗。慢性乙型肝炎患者缺乏有效特异性细胞免疫应答 ,从而不能清除感染者体内的 HBV。DNA 疫苗的主要优点可同时诱发持久的特异性细胞及体液免疫 ;体内抗原加工提呈 ,有效激发 CTL ; 质粒骨架上的 Cp G佐剂效应可增强 Th1 应答。HBV DNA 疫苗 (表面抗原 DNA 质粒)在多种动物模型上取得了令人鼓舞的结果[4 ] : ( 1 ) DNA 疫苗在 HL A2A211 Tg 小鼠模型 (无症状 HBV 携带者模型) 上其位点加工与 HBV 自然感染相似 ; (2) 在 HBV2Tg小鼠模型证明 , DNA 疫苗可打破对 HBsAg 的免疫耐受 , 引起特异性 CD4 + 与 CD8 + T 细胞免疫应答 ,清除血清中 HBsAg ,控制肝内病毒基因的表达 ,Th1 型细胞因子分泌可调节肝内病毒转录而不裂解肝细胞 ; (3) 地松鼠肝炎 ( W HV) 模型证实 S 蛋白DNA 疫苗引起的增生型 T 细胞应答可防御 W HV强毒株的攻击 ; (4) 鸭肝炎模型表明 ,大 S 抗原的DNA 疫苗免疫可降低或完全抑制病毒的复制 ; (5)黑猩猩模型证实 HBV 包膜蛋白 DNA 疫苗的免疫效果 , S 蛋白 DNA 免疫慢性 HBV 感染黑猩猩后 ,重组痘病毒加强免疫 , 可导致血浆中病毒载量大幅度下降 , 6 个月内用 PCR 检测不出病毒。HBVDNA 疫苗免疫血清阴性的健康志愿者 ,可检测到体液与细胞免疫且疫苗接受程度高。HBV DNA 疫苗已进行大量研究 ,但其安全性及有效性难以确定[5 ] 。Nakamura 等[6 ]发现用基因枪直接免疫肝脏可产生较接种皮肤更强的体液免疫。赫兢等[7 ]采用美国 FDA 批准、在国外艾滋病临床试验中已证实了安全性的载体 VR1012 ,插入 HBsAg , PreS22HBsAg , HBsAg2EN H I 和 PreS22 HBsAg2EN H I基因片段后 , EL ISA 法转染的 Hep G2 细胞可见HBsAg 阳性表达 ,蛋白印迹法检测可见与 HBsAg大小相等的蛋白条带 ,说明充组质粒在真核细胞内表达 HBsAg ;接种小鼠可产生抗2HBsAg 及 HB2sAg 特异性 CTL ,可以作为 HBV DNA 疫苗进一步研究。Yang[8 ]等 , 采用拉米夫定、IL212 与 DNA 疫苗联合应用于 12 例慢性 HBV 携带者 , 受试者耐受性好 , 其中 8 名受试者对该免疫程序应答 , 表现为5201医学理论与实践 2007 年第 20 卷第 9 期　J Med Theor & Prac Vol1 20 ,No1 9 ,Sep 2007最后一次免疫后病毒 DNA 消失持续 1 年。病毒清除同时伴随有血清 IL22 浓度增高。并首次证明DNA 疫苗结合拉米夫定治疗可引起 IFN2γ分泌的记忆性 T 细胞应答 ,停药后长期抑制病毒复制。李文波等[9 ]构建真核表达质粒 pCR 3. 12S 作为 HBV基因疫苗 ,应用其免疫 BALB/ c 小鼠 ,发现 : ( 1)HBV 基因疫苗 pCR 3. 12S 可诱导小鼠产生抗 HBs反应 ,且呈剂量、时间相关。免疫接种次数不同 ,抗HBs 效价有差异 ; (2) 与空载体对照比较 , HBV 基因疫苗免疫小鼠淋巴细胞经 HBsAg 抗原体外刺激后增殖明显 ; (3) 体外淋巴细胞杀伤功能测定亦显示 , HBV 基因疫苗免疫小鼠明显强于空载体对照组 ,提示 HBV 基因疫苗 pCR3. 12S 可诱发 BALB/ c小鼠产生全面的免疫应答。研究发现 ,部分 HBsAg蛋白或肽冲击的树突状细胞 (DC) 疫苗抗 HBV 治疗效果明显优于 DNA 疫苗和重组 HBsAg 疫苗 ,但抗病毒免疫应答还不是十分令人满意[10 ] 。黄茵等[11 ] 研究了 HBsAg 基因修饰的树突状细胞诱导HBV 转基因小鼠的免疫应答。以腺病毒为载体HBsAg 基因修饰的 DC 疫苗能诱导比 HBsAg 蛋白冲击 DC 及 DNA 疫苗更强的 Tc1 细胞应答和特异性 CTL 反应 ,对 HBV Tg 小鼠血清 HBsAg、HBVDNA 水平和肝组织 HBcAg 和 HBsAg 的表达有较迅速和明显的抑制作用 ,对慢性乙型肝炎的免疫治疗有较好的临床应用前景。周陶友等[12 ] 从乙型肝炎患者血清中扩增 S2S 基因 , 构建表达质粒pVAX12S2S , 从成人外周血白细胞总 RNA 中 ,逆转录聚合酶链反应扩增干扰素α基因 I ,将其与 S2S相连 ,构建重组表达质粒 pVA X12S2S , 将干扰素α基因 I 与人工合成的胸腺素α基因 T 相连 ,构建重组表达质粒 pVAX12T/ I ,将上述表达质粒分组肌肉注射 BALB/ c 小鼠 ,胸腺素αI 和/ 或干扰素α基因的表达具有分子免疫佐剂的效应 ,能够增强乙型肝炎基因疫苗的特异性体液免疫诱生效力。2. 2 　亚单位疫苗 　Chen 等[13 ] 应用 HBcAg 与PreS1 融合蛋白疫苗在 HBV Tg 小鼠中进行免疫治疗研究 ,结果表明该融合蛋白疫苗可诱导特异性免疫 (3 H2TdR 掺入法淋巴细胞特异性增殖反应) ,并抑制 HBV DNA 复制 (荧光定量 PCR) 与 HBsAg表达 ( EL ISA) 。HBV 衣壳蛋白中 HBsAg、PreS1、PreS2 和 HBcAg 任一组合构成亚单位疫苗 ,近年多项临床试验研究联合使用亚单位疫苗和抗病毒药物 ,或直接优化现有疫苗后改进使用方法 ,能不同程度打破免疫耐受 ,在治疗 HBV 感染方面取得肯定的效果[14 ] 。3 　丙型肝炎 DNA 疫苗丙型肝炎目前无有效的特异性治疗方法 , 急需寻求预防 HCV 感染的疫苗。HCV DNA 疫苗是近年发展起来的新型疫苗之一。近年来 , 国内外学者纷纷构建 HCV 四个不同区段 (核心区、包膜区、结构区及非结构区) 的 DNA 疫苗 ,免疫动物后 ,部分显示出保护性反应[ 15 ] 。许信刚等构建了 HCV 囊膜蛋白基因 E1 E2 重组表达载体 pcDNA4. 12E1 E2 ,使之在真核细胞中获得表达 ,并免疫小鼠诱导了体液免疫应答[16 ] 。王全楚等[17 ] , 选用人 Ig G1 Fc 段基因作为目的基因 , 插入到含我国常见的 HCV Ⅱ型 H 株 C 区基因的载体 pcDNA3 HCV C 中 ,以此为基础构建HCV C2Fc 融合基因的真核表达载体 pcDNA3HCV2Fc , 经双酶切、PCR 扩增测序三重鉴定 ,证实插入片段为 Fc 区基因 ,重组质粒 pcDNA3 HCV2Fc在人肝癌细胞 7721 中瞬时表达了 Fc 抗原及其功能的完整性。在此基础上利用融合基因修饰的 DC 作为疫苗在丙型肝炎细胞和动物模型中 ,应用分子克隆技术构建含 Ig G Fc 段的 HCV C2Fc 融合基因疫苗 ,用脂质体直接转染法将 HCV DNA 疫苗 ,直接转染到培养好的 DC 中制成 DC 疫苗 ,用于免疫BALB/ c 小鼠 ,诱导出强烈的细胞和体液免疫反应 ,为提高基因疫苗诱导免疫应答的效率提供了新的手段 ,为丙型肝炎防治提供了新的思路和理论依据[18 ] 。4 　戊型肝炎疫苗目前已报道的有关 H EV 疫苗的研究多为基因重组蛋白疫苗 , H EV 的抗原表位位于 ORF2 和ORF3 编码的结构蛋白上 , 临床上用于检查血清H EV 抗体及对 H EV 疫苗的研究多围绕 ORF2 和ORF3 而设计的[19 ] 。洪艳等利用 PCR 方法获得约0. 8kb 的戊型肝炎 ORF2 片段和 ORF3 的完整片段 , 同时将两片段克隆到同一真核表达载体 pcD2NA3 中 , 构建含 ORF2 和 ORF3 嵌合基因的质粒pc H EV23 ;将该重组质粒作为 DNA 疫苗免疫BALB/ c 小鼠 , 其可诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答[20 ] 。周永东等[21 ] ,采用大肠杆菌表达的 H EV 结构区 ORF2 的重组蛋白 ,纯化后与新型粘膜佐剂类MF59 配制成试验性疫苗 ,通过滴鼻和灌胃等粘膜途径免疫实验小鼠 ,均能诱导小鼠产生针对 H EVORF2 试验性疫苗的血清 Ig G 和 IgA ,血清抗体可持续存在至少 6 个月以上 ,比较类 MF59 佐剂和传统铝盐佐剂注射免疫所诱导产生的血清 Ig G 抗体6201 医学理论与实践 2007 年第 20 卷第 9 期　J Med Theor & Prac Vol120 ,No19 ,Sep 2007滴度 ,发现类 MF59 佐剂可有效增强 H EV ORF2重组蛋白的免疫原性约 4 倍 ,类 MF59 佐剂可诱导粘膜免疫反应 ,在肠道粘膜部位产生 SIgA ,滴度为1 ∶100 ,这一研究结果为新型 H EV 基因工程重组疫苗的研制提供了一条新思路。5 　结语肝炎疫苗的研究在于寻找高效、安全、可靠、免疫力持久的疫苗 ,目前在疫苗研制中存在很多尚待解决的问题。DNA 疫苗的研究近年来发展迅速 ,日益显示出其巨大的潜力和应用前景。但是 ,他的历史毕竟很短 ,还有许多问题急需解决 : (1) 安全性。尽管现有的动物实验研究未发现任何副作用 ,但仍有必要进一步研究以探明外源 DNA 是否与宿主染色体整合。(2) DNA 接种的免疫学机制仍待深入研究。(3)接种途径、接种方式及诱导效率有待进一步提高。HAV 和 H EV 主要传播途径为消化道 ,为获得高效免疫 ,有效的口服疫苗研制显得尤其重要 ,其能刺激机体消化道产生 SIgA , 达到较好的预防效果。HBV 的变异及个体对疫苗的敏感性不一致 ,导致HBV 疫苗接种失败是 HBV 疫苗有待解决的问题。HCV 疫苗面临的挑战 ,仍然是病毒蛋白的高变性 ,尤其是包膜蛋白的变异更为主要 ,而与 HCV 相关的 LDL 蛋白又使得大部分病毒颗粒具有不可中和性 ,更是进一步的挑战。这些问题的解决很可能是HCV 疫苗研制能否取得突破的关键 ,寻找 HCV 株间的交叉表位以及通过 DNA 疫苗策略激发 CTL应答可能会有所帮助。参 考 文 献1 　贾文祥 ,主编. 医学微生物学〔M〕. 北京 :人民卫生出版社 ,2005.3492352.2 　龙润乡 ,候宗柳 ,谢忠平 ,等. 甲肝减毒活疫苗口服免疫动物后的抗体反应〔J〕. 标记免疫分析与临床 ,2006 ,13 (1) :24226 ,18.3 　陈晨 ,唐俊杰 ,杨志军 ,等. 甲型肝炎减毒活疫苗及灭活疫苗灌胃免疫小鼠后的抗体应答〔J〕. 中国免疫学杂志 ,2002 ,18 (3) :162.4 　Michel ML ,Manvini2Bourgine M. Therapeutic vaccination againstchronic hepatitis B virus infection〔J〕. J Clin Virol ,2005 ,34 (Sup2pll) : 1082114.5 　Beckebaum S , Cicinnati VR , Gerken G ,et al . DNA2based immu2not herapy : potential for t reat ment of chronic viral hepatitis〔J〕.Rev Med Virol , 2002 ,12 :2972319.6 　Nakamura M ,Wang J ,Murakami T ,et al . DNA immunization oft he grafted liver by particle2mediated gene gun〔J〕. Transplata2tion , 2003 ,76 :136921375.7 　赫兢 ,辛绍杰 ,毛选丽 ,等. 乙型肝炎病毒复制调控元件对 HBVDNA 疫苗诱导的免疫应答〔J〕. 中华传染病杂志 ,2006 ,24 (5) :3112315.8 　Yang S H ,Lee CG , Park S H ,et al . Correlation of antivirual T2cell resposes wit h suppression of virual rebound in chronic hepati2tis B carriers : a proof2of2concept study〔J 〕. Gene Therapy ,2006 :128.9 　李文波 , 张修礼 ,姚志强. 乙型肝炎病毒基因疫苗诱导小鼠产生免疫应答的效应〔J〕. 临床消化病杂志 ,2003 ,15 (5) : 1952197.10 　Akbar SM , Furukawa S , Hasebe A , et al . Production and effi2cacy of a dendritic cell2based t herapeutic vaccine for murinecheronic hepatitis B virus carrierer〔J〕. Int J Mol Med , 2004 ,14 :2952299.11 　黄茵 ,陈智 ,贾红宇 ,等. HBsAg 基因修饰的树突状细胞诱导HBV 转基因小鼠的免疫应答〔J〕. 中华传染病杂志 , 2006 ,24(5) :3062310.12 　周陶友 ,赵连三 ,陈敏 ,等. 胸腺素及干扰素基因表达对乙型肝炎基因疫苗的免疫增强效应〔J〕. 中华肝脏病杂志 , 2005 ,13(7) :4972500.13 　Chen X , Li M , Le X ,et al . Recombinant hepatitis B core anti2gen carrying PreS1 epitopes induce immune response againstchronic HBV infection〔J〕. Vaccine ,2004 ,22 :4392446.14 　徐宁 ,陈智. 乙型肝炎病毒亚单位疫苗应用于慢性乙型肝炎治疗的新进展〔J〕. 国际流行病学传染病杂志 ,2006 ,33 (1) : 42244.15 　楚莉辉 ,李琦涵. 丙型肝炎 DNA 疫苗研究进展〔J〕. 国外医学 ·病毒学分册 , 2004 ,11 (5) :1412145.16 　许信刚 ,胡建和 ,张彦明 ,等. 丙型肝炎病毒囊膜蛋白基因 DNA疫苗的建立及动物免疫试验〔J〕. 中国病毒学 ,2005 ,20 (5) :5492551.17 　王全楚 ,冯志华 ,周永兴 ,等. 丙型肝炎病毒核心区与 Ig G Fc 段融合基因疫苗的构建及表达〔J〕. 医学研究生学报 , 2003 , 16(3) :1612163.18 　王全楚 ,申德林 ,周永兴 ,等. 丙型肝炎基因修饰的树突状细胞疫苗研究〔J〕. 医学研究杂志 ,2006 ,35 (6) :35236.19 　胡华军 ,陈勇 ,洪艳. 戊型肝炎病毒的研究概况及进展〔J〕. 国际流行性学传染病学杂志 ,2006 ,33 (3) :1972200.20 　洪艳 , 阮冰 ,杨连华 ,等. 戊型肝炎病毒嵌合基因疫苗的初步研究〔J〕. 中国公共卫生 ,2004 ,20 (7) :8872888.21 　周永东 ,张明程 ,蒋琳 ,等. 粘膜免疫戊型肝炎试验性疫苗的研究〔J〕. 病毒学报 ,2005 ,21 (1) :125.收稿日期 2006203204(编辑 　晓旭)●致作者●　　为适应我国信息化建设 ,扩大本刊及作者知识信息交流渠道 ,本刊已被 CN KI 中国期刊全文数据库收录。如作者不同意自己的文章被收录 ,请在来稿时向本刊声明 ,本刊将做适当处理 ;未作此声明者本刊视为作者已同意文章被收录在该数据库中。7201医学理论与实践 2007 年第 20 卷第 9 期　J Med Theor & Prac Vol1 20 ,No1 9 ,Sep 2007

肝炎疫苗的研究进展

http://dspace.xmu.edu.cn/bitstream/handle/2288/142814/%e8%82%9d%e7%82%8e%e7%96%ab%e8%8b%97%e7%9a%84%e7%a0%94%e7%a9%b6%e8%bf%9b%e5%b1%95.pdf?sequence=1&isAllowed=y

肝炎疫苗的研究进展

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Xiamen University Institutional Repository