Con el objetivo de investigar la seroprevalencia de Leucosis Enzoótica Bovina (LEB) en la cuenca lechera del departamento de Santa Cruz - Bolivia, se procesaron 1769 sueros de bovinos hembras, mayores de dos años, de diferentes razas existentes en la región, durante los meses de Abril a Septiembre 2009, pertenecientes a 94 unidades productivas (tambos) distribuidas en cinco provincias del departamento (Andrés Ibáñez, Warnes, Ichilo Obispo Santistevan y Sara). La técnica serológica utilizada fue inmunodifusión en gel de agar. Los resultados se interpretaron de acuerdo a las variables: provincia, raza y edad. Los datos fueron analizados mediante la prueba de x2 y Fisher. Sobre el total de animales muestrea- dos, 492 de las muestras fueron positivos, lo cual representa una prevalencia del 27,81%. La mayor seroprevalencia fue encontrada en las provincia Obispo Santistevan (52,50%) y Warnes (38,44%), observándose diferencias significativas (p0.05). No se encontraron diferencias significativas de seroprevalencia asociadas a las variables raza y edad (p>0.05). Ningún animal se evidenció sintomatología clínica compatible con la enfermedad.During the months of April to September 2009, 1769 serum samples from cows over two years old, from different races belonging to 94 productive units in five provinces of the department (Andrés Ibáñez, Warnes, Ichilo Obispo Santistevan and Sara) were processed in order to investigate the seroprevalence of Enzootic Bovine Leukosis (EBL) in the milk basin of the department of Santa Cruz - Bolivia. The serological technique used in this study was agar gel immunodiffusion. The results were interpreted according to the variables: province, race and age. The data were analyzed by x2 and Fisher test. Over all animals sampled, 492 samples were positive to ELB, representing a prevalence of 27,81%. The higher prevalence was found in the provinces of Obispo Santistevan (52,50%) and Warnes (38,44%), showing significan! differences (p 0.05).There were no significant differences in seroprevalence associated with race and age variables (p > 0.05). No animals showed clinical symptoms compatible with the disease.Facultad de Ciencias Veterinaria