El objetivo del presente trabajo fue el estudio citoarquitectural de los segmentos cervicales y torácicos del timo en fetos de alpaca (Lama pacos). Se recolectaron 10 fetos entre 40 y 190 días de desarrollo para ser sometidos a estudio histológico. A los 40 días, el esbozo del timo tiene una morfología citoarquitectural de tipo acinar infiltrado por escasas células linfocíticas y rodeado por células mesenquimales. A los 60 días, el segmento cervical se presenta como un “folículo” linfoide densamente poblado por timocitos, mientras que la región torácica tiene una apariencia cavitaria con proyecciones trabeculares cortas. La diferenciación de corteza y médula se inicia en los segmentos cervicales posteriores y torácicos a los 100 días y en los segmentos cervicales anteriores a los 130 días. Todos los segmentos presentan disposición lobulillar bien definidos en corteza y médula a los 165 días. La cápsula tímica se mantiene principalmente como una doble capa celular con tejido conjuntivo laxo. Los vasos sanguíneos subcapsulares y trabeculares presentan endotelio fenestrado. Las células eritroblásticas se ubican en las zonas subcapsularesThe objective of the present study was to study the cytoarchitectural structure of the cervical and thoracic segments of thymus in alpaca (Lama pacos) fetuses. For this purpose, 10 fetuses between 40-190 days of gestation were collected form the local slaughterhouse. At day 40, the developing thymus has acinar cytoarchitectural morphology, infiltrated by a few lymphoid cells surrounded by mesenchymal cells. At day 60, the cervical segment looks like a «follicular» lymphoid, densely populated by thymocytes, whereas the thoracic region has a cystic appearance with short trabecular projections. Cortex and medulla differentiation starts in the posterior cervical and thoracic segments by day 100 and in the anterior cervical segments by day 130, and is well established by day 165. The thymic capsule remained as a double cellular layer of lax connective tissue. Subcapsular and trabecular blood vessels have fenestrated endothelium. Erythroblastic cells were observed by day 100 in the cortex and subcapsule zones. Medullar Hassall’s corpuscles were observed by day 100, and the epithelial reticular cell barrier in the cortical medullar zone was observed by day 130

Chavera C., Alfonso

Manchego S., Alberto

Montenegro B., Juan

Sandoval Ch., Nieves

Revista de Investigaciones Veterinarias del Perú

Spanish

The objective of the present study was to study the cytoarchitectural structure of the cervical and thoracic segments of thymus in alpaca (Lama pacos) fetuses. For this purpose, 10 fetuses between 40-190 days of gestation were collected form the local slaughterhouse. At day 40, the developing thymus has acinar cytoarchitectural morphology, infiltrated by a few lymphoid cells surrounded by mesenchymal cells. At day 60, the cervical segment looks like a «follicular» lymphoid, densely populated by thymocytes, whereas the thoracic region has a cystic appearance with short trabecular projections. Cortex and medulla differentiation starts in the posterior cervical and thoracic segments by day 100 and in the anterior cervical segments by day 130, and is well established by day 165. The thymic capsule remained as a double cellular layer of lax connective tissue. Subcapsular and trabecular blood vessels have fenestrated endothelium. Erythroblastic cells were observed by day 100 in the cortex and subcapsule zones. Medullar Hassall’s corpuscles were observed by day 100, and the epithelial reticular cell barrier in the cortical medullar zone was observed by day 130.El objetivo del presente trabajo fue el estudio citoarquitectural de los segmentos cervicales y torácicos del timo en fetos de alpaca (Lama pacos). Se recolectaron 10 fetos entre 40 y 190 días de desarrollo para ser sometidos a estudio histológico. A los 40 días, el esbozo del timo tiene una morfología citoarquitectural de tipo acinar infiltrado por escasas células linfocíticas y rodeado por células mesenquimales. A los 60 días, el segmento cervical se presenta como un “folículo” linfoide densamente poblado por timocitos, mientras que la región torácica tiene una apariencia cavitaria con proyecciones trabeculares cortas. La diferenciación de corteza y médula se inicia en los segmentos cervicales posteriores y torácicos a los 100 días y en los segmentos cervicales anteriores a los 130 días. Todos los segmentos presentan disposición lobulillar bien definidos en corteza y médula a los 165 días. La cápsula tímica se mantiene principalmente como una doble capa celular con tejido conjuntivo laxo. Los vasos sanguíneos subcapsulares y trabeculares presentan endotelio fenestrado. Las células eritroblásticas se ubican en las zonas subcapsulare

LAReferencia - Red Federada de Repositorios Institucionales de Publicaciones Científicas Latinoamericanas

26Rev Inv Vet Perú 2006; 17 (1): 26-321 Práctica privada. E-mail: jubevet76@walla.com2 Laboratorio de Histología, Embriología y Patología, FMV–UNMSM3 E-mail: nieves_1@mixmail.com4 Laboratorio de Microbiología y Parasitologìa Veterinaria, FMV-UNMSMCARACTERIZACIÓN HISTOLÓGICA DEL TIMOEN FETOS DE ALPACAJuan Montenegro B.1, Nieves Sandoval Ch.2,3, Alfonso Chavera C.2 yAlberto Manchego S.4ABSTRACTThe objective of the present study was to study the cytoarchitectural structure ofthe cervical and thoracic segments of thymus in alpaca (Lama pacos) fetuses. For thispurpose, 10 fetuses between 40-190 days of gestation were collected form the localslaughterhouse. At day 40, the developing thymus has acinar cytoarchitecturalmorphology, infiltrated by a few lymphoid cells surrounded by mesenchymal cells. Atday 60, the cervical segment looks like a «follicular» lymphoid, densely populated bythymocytes, whereas the thoracic region has a cystic appearance with short trabecularprojections. Cortex and medulla differentiation starts in the posterior cervical and thoracicsegments by day 100 and in the anterior cervical segments by day 130, and is wellestablished by day 165. The thymic capsule remained as a double cellular layer of laxconnective tissue. Subcapsular and trabecular blood vessels have fenestratedendothelium. Erythroblastic cells were observed by day 100 in the cortex and subcapsulezones. Medullar Hassall’s corpuscles were observed by day 100, and the epithelial reticularcell barrier in the cortical medullar zone was observed by day 130.Key words: alpaca, fetus, thymus, Hassal corpuscleRESUMENEl objetivo del presente trabajo fue el estudio citoarquitectural de los segmentoscervicales y torácicos del timo en fetos de alpaca (Lama pacos). Se recolectaron 10 fetosentre 40 y 190 días de desarrollo para ser sometidos a estudio histológico. A los 40 días,el esbozo del timo tiene una morfología citoarquitectural de tipo acinar infiltrado porescasas células linfocíticas y rodeado por células mesenquimales. A los 60 días, el seg-mento cervical se presenta como un “folículo” linfoide densamente poblado por timocitos,mientras que la región torácica tiene una apariencia cavitaria con proyecciones trabecularescortas. La diferenciación de corteza y médula se inicia en los segmentos cervicales pos-teriores y torácicos a los 100 días y en los  segmentos cervicales anteriores a los 130 días.Todos los segmentos presentan disposición lobulillar bien definidos en corteza y médulaa los 165 días. La cápsula tímica se mantiene principalmente como una doble capa celularcon tejido conjuntivo laxo. Los vasos sanguíneos subcapsulares y trabeculares presen-tan endotelio fenestrado. Las células eritroblásticas se ubican en las zonas subcapsulares27Rev Inv Vet PerúCaracterización histológica del timo en fetos de alpacasy corticales periféricas desde los 100 días. La barrera hematotímica comienza a organizar-se desde los 60 días. Los corpúsculos medulares de Hassal son evidentes a los 100 díasy la barrera celular reticular epitelial en la zona corticomedular se encuentra desde los 130días.Palabras clave: alpaca, feto, timo, timocito, corpúsculo de HassalINTRODUCCIÓNLa alpaca (Lama pacos), especie nati-va y de gran potencial económico en el Perú,es susceptible a múltiples agentes patógenos,especialmente en hatos con inadecuados ni-veles tecnológicos de crianza.La respuesta frente a un agente pató-geno es dado por el sistema inmunológico,siendo el timo un órgano inmune primario quecumple un rol central en el sistema inmune.Allí, las células linfoides de la línea T puedandesarrollar, proliferar, madurar, generar surepertorio de receptores de antígenos, y de-jar este órgano para poblar órganos linfoidessecundarios (Romano et al., 1999). La es-tructura histológica del timo y la ontogeniadel sistema inmune ha sido estudiada y esta-blecida en la mayoría de especies domésti-cas (Osburn et al., 1982; Tizard, 2002); sinembargo, no se dispone de estudios en fetosde camélidos sudamericanos.El objetivo del presente estudio fue ca-racterizar histológicamente el desarrollo deltimo en la etapa fetal de la alpaca, estable-ciendo los tipos celulares que lo conformandurante su desarrollo estructural e infiriendola probable función inmunológica que puedaefectuar en la etapa fetal.MATERIALES  Y MÉTODOSSe emplearon 10 fetos de alpacas en-tre 40 y 190 días de edad gestacional, prove-nientes de hembras de descarte que fueronsacrificadas en un camal de la ciudad deHuancayo, Junín. La zona se encuentra a3,350 msnm.La edad gestacional fue determinadautilizando como referencia el diámetrobiparietal fetal (Gazitua et al., 2001), medidoa través de un caliper Pretul de 5”. Los fetosfueron extraídos de las bolsas amnióticas yfijados de inmediato en formol bufferado al10%.La obtención del tejido tímico se realizóen base a los siguientes criterios:- En fetos mayores de 4 meses el timo, sediseccionó in situ, obteniéndose seccio-nes de tejido de la porción cervical ytorácica.- En fetos menores de 4 meses, se hicie-ron cortes o secciones transversales alo largo del cuello y entrada del tórax.La descripción histológica del desarro-llo embriológico del timo se hizo en seis gru-pos etáreos: 40, 60, 100, 130, 165 y 190 díasde edad fetal aproximada (los últimos 4 gru-pos estuvieron compuestos por 2 fetos).Las muestras se sometieron a técnicashistológicas de rutina y se emplearon 4tinciones: Hematoxilina Eosina para la distri-bución de parénquima y estroma, Massonpara la distribución de las fibras colágenas,Wilder para la distribución de las fibrasreticulares, y Jonson para observar los grá-nulos de los mastocitos.Rev Inv Vet Perú28J. Montenegro et al.RESULTADOSEl timo, a los 40 días de desarrollo em-briológico, se presenta como una organizaciónde células reticulares epiteliales poliédricas denúcleos basófilos a manera de cordones yacinos, tomando una apariencia glandular (Fig.1). Se observan células esféricas con núcleospequeños y escaso citoplasma, compatiblescon células linfoides (timocitos), dispuestasdentro y entre los cordones o rosetas a niveldel timo torácico.A la edad de 60 días, el timo se observacomo una estructura “folicular” densamentepoblada por timocitos en los segmentos cervi-cales (Fig. 2), mientras que se muestra unaorganización seudolobulillar indiferenciada,aparentando un “órgano cavitario” en el seg-mento torácico (Fig. 3). Dentro de éstas “ca-vidades tímicas” no existe organización celu-lar definida, encontrándose los timocitos y lascélulas reticulares epiteliales dispuestosaleatoriamente, así como múltiples tipos celu-lares inmaduros de la línea mieloblástica, ade-más de abundantes vasos sanguíneos tortuo-sos y pletorizados.A la edad de 100 días, la estructura“folicular” de los segmentos tímicos cervica-les muestra una tenue diferenciación medular.Están cubiertos por una cápsula compuestapor doble capa de tejido conjuntivo laxo y doscapas celulares de fibroblastos (Fig. 4). Laestructura seudolobulillar del segmentotorácico se encuentra diferenciada en corte-za y médula. La corteza está tapizada porcélulas reticulares epiteliales limitantes y enla zona medular se aprecian macrófagos (Fig.5) y  corpúsculos de Hassal (Fig. 6). Estosson cuerpos acidófilos que constituyen célu-las reticulares epiteliales aplanadas y frecuen-temente hialinizadas, dispuestas alrededor deuna zona central constituída por una o variascélulas queratinizadas (pigmentos basófilos)y/o degeneradas. En las zonas trabeculares ysubcapsulares se encontraron algunos gruposde células eritroblásticas. Así mismo, la barre-ra hemato-tímica se encuentra definida.A la edad fetal de 130 días, tanto la es-tructura seudolobulillar de la sección cervi-cal como la estructura lobulillar de la sec-ción torácica están diferenciadas en cortezay médula. Las células reticulares epitelialesde la zona corticomedular se encuentran es-trechamente relacionadas conformando unabarrera celular que divide corteza y médula(Fig. 7). Los corpúsculos de Hassal de lamédula son evidentes. En las zonassubcapsulares y trabeculares  se observa untipo celular granular (mastocito).Las secciones cervical y torácica pre-sentan como una estructura lobulillar dife-renciada en corteza y médula a los 165 díasde desarrollo fetal. En las zonassubcapsulares y trabeculares se encuentranabundantes y variados tipos celulares de lalínea mieloide y eritroblástica.La estructura de ambas secciones a los190 días es similar a la observada a los 165días, con la salvedad de que en algunas zo-nas de la sección torácica, la cápsula se hacemás fina presentando una sola capa celular.En las áreas subcapsulares y trabecularesse encuentran, dentro los tipos celulares dela línea mieloide, grupos de célulaseritroblásticas (Fig. 8) y otras compatiblescon células plasmáticas.La medida diametral de los timocitosmedulares es mayor que de los corticales(Cuadro 1). Los timocitos medulares presen-tan un núcleo más grande y de mayor conte-nido citoplasmático.DISCUSIÓNEl esbozo del timo en los fetos dealpacas se hizo visible a los 40 días de edad,similar a lo descrito en el feto bovino (Schultzet al., 1973), a pesar que las alpacas tienenun periodo de gestación más largo (11 me-ses). Las formaciones celulares a manerade acinos glandulares, cordones o rosetas fuesimilar a lo descrito para animales domésti-29Rev Inv Vet PerúCaracterización histológica del timo en fetos de alpacasFigura 1. Feto de 40 días. Esbozo del timo rodea-do por células mesenquimales (m), célulasreticulares epiteliales como cordones y acinos (A)rodeados por vasos con eritrocitos (E). H.E. 400xFigura 2. Feto de 60 días. Corte transversal de laregión cervical anterior. Primordio de esófago(E), traquea (T), timo (→). H.E. 50xFigura 3. Feto de 60 días. Corte longitudinal dela región torácica. Timo con apariencia cavitaria.Vasos sanguíneos y trabéculas formando seudolobulillos. H.E. 100xFigura 4. Feto de 100 días. Sección craneal.Bicapa capsular (B) cubriendo la corteza tímica(C). Vaso sanguíneo con endotelio fenestrado(Vc). H.E. 400xFigura 5. Feto de 100 días. Sección torácica. Zonacortical con timocitos (T), células reticulares epite -liales corticales (R) y macrófagos (→). H.E. 1000xFigura 6. Feto de 100 días. Sección torácica. Cor-púsculo de Hassal (CH) en zona medular. Célu-las reticulares degeneradas con pigmento basó-filo (Pc) y con sustancia anhista (SA). H.E. 1000xRev Inv Vet Perú30J. Montenegro et al.Figura 7. Feto de 130 días. Células reticularesepiteliales (R) dispuestas en fila conformandouna barrera en la zona corticomedular. Vaso san-guíneo corticomedular (Vc) con endoteliofenestrado (↔). H.E. 1000xFigura 8. Feto de 190 días. Sección cervical an-terior. Zona subcapsular mostrando agrupamien-to de células eritroblásticas (Eb) que presentannúcleo básofilo prominente con nucleolos yacidofilia citoplasmática. H.E. 1000xCuadro 1. Medida diametral del timocito en corteza y médula tímica en 4 etapas del crecimiento fetal. Edad Fetal  (días) Corteza (µm ± d.e.) Médula (µm ± d.e.) 100 3.7 ± 0.5 4.6 ± 0.7 130 3.7 ± 0.5 4.5 ± 0.6 165 4.3 ± 0.5 4.7 ± 0.6 190 4.2 ± 0.5 5.1 ± 0.7 cos (Jubb et al., 1993), donde el componenteepitelial reticular es desplazado caudalmenteen el cuello e invade el intersticio mediastínicocon yemas tipo roseta irregulares y sólidasque crecen para formar los lóbulos primor-diales. Los linfocitos (timocitos) que se ob-servan a los 40 días en la alpaca son igual-mente observados en el timo fetal bovino(Osburn et al., 1982) y ovino (Jubb et al.,1993) en edades similares.Se presume que éstas células son lasprimeras células pro timocitos (linfoblastos)que están siendo reclutadas desde órganoshematopoyéticos fetales hacia el timo primi-tivo para poblarlo, comenzar el proceso demaduración tímico y dar origen a los prime-ros linfocitos T.El desarrollo temprano del sistemalobular primitivo, donde las células reticularesepiteliales que forman las yemas tipo rosetasse estratifican tomando formas sólidas inicial-mente y luego se hacen císticas como, al pa-recer, sucede en el timo fetal de alpaca, hasido descrito por Jubb et al. (1993). La inva-sión vascular se presentó previo a la forma-ción de lóbulos con componentes medularesy corticales, tal como ha sido reportado en laliteratura (Banks, 1992).La cápsula tímica, a partir de los 100días, está conformada por una capa externaque cubre la periferia del lóbulo tímico y unacapa interna que delimita el contorno perifé-rico de la corteza del lóbulo (Sainte-Marie et31Rev Inv Vet PerúCaracterización histológica del timo en fetos de alpacasal., 2005), similar a lo encontrado en el pre-sente estudio. Además, en el timo fetal de laalpaca se encuentran abundantes vasos san-guíneos subcapsulares pletorizados deendotelio plano fenestrado, así como célulasde la línea blanca y roja. En la rata neonatalocurre un patrón similar, donde los leucocitosse encuentran próximos a los capilaressubcapsulares y participan en acontecimien-tos tímicos peculiares, tales como el recluta-miento de células precursoras sanguíneas(Sainte-Marie et al., 2005).Diferencias morfológicas entre timo-citos, donde los corticales fueron más peque-ños que los medulares, se describen en otrasespecies como los humanos (Junquera et al.,1988) y la brema del mar (Romano et al.,1999).Los macrófagos que se observan des-de los 60 días en los fetos de alpaca cumpli-rían la función de remoción de los cuerposapoptósicos, aunque no se pudo determinarestos cuerpos. En el timo fetal se pudo apre-ciar la unión corticomedular como una ba-rrera de células reticulares epiteliales dispues-tas secuencialmente próximas entre sí. Allí,según Abbas et  al. (2002), ocurriríaninteracciones físicas con las célulasreticulares epiteliales durante la migración delos timocitos a través de la unióncorticomedular.La porción torácica del timo se organi-za a partir de la edad fetal de 100 días en lo-bulillos con corteza definida que compartenuna médula común, donde la presencia delcorpúsculo medular de Hassal es evidente.Estos corpúsculos aparecen más tardíamen-te que en el feto bovino donde ocurre a los65 días (Schultz et al., 1973). Tales corpús-culos se observaron de manera similar a lodescrito por Banks (1992) y Dellmann yBrown (1980).En el timo fetal de alpaca se apreciangrupos celulares hematopoyéticos indiferen-ciados, formando nidos compatibles con cé-lulas eritroblásticas. Tienen núcleo esféricobasófilo intenso, con presencia de nucleolosy citoplasma acidófilo, y una proporción denúcleo a citoplasma de 6:1. Estas células seubican en las cavidades del timo inmaduro de60 días, pero a partir de que el timo se organi-za, sus cavidades se pueblan de timocitos,definiéndose la corteza y médula. Las célulasse ubican principalmente en las áreastrabeculares, subcapsulares, y ocasionalmen-te en la corteza periférica. Vicente et al. (1998)reportan que el parénquima cortical del timode rata hospeda una eritropoyesis transitoriaalrededor del nacimiento. Esto indicaría que eltimo fetal de alpaca también estaría cumplien-do alguna función eritropoyética aislada.CONCLUSIONES• El desarrollo citoarquitectural del timofetal de alpaca sigue un patrón similar alde otras especies de rumiantes domésti-cos.• El rudimento tímico está presente a laedad de 40 días, definiéndose en cortezay médula a la edad de 100 días en lossegmentos cervicales posteriores ytorácicos y a los 130 días de edad en losdemás segmentos.• Los corpúsculos de Hassal se encuen-tran en la médula tímica a partir de los100 días de edad.• El timo fetal de alpaca alberga algunosnidos celulares eritroblásticos.LITERATURA CITADA1. Abbas, A.K.; A.H. Lichtman; J.S.Pober. 2002. Inmunología celular ymolecular. 4ta ed. p 129-165. McGraw-Hill Interamericana. Madrid.2. Banks, J. 1992. Histología veterinariaaplicada. p 399-415. Ed. Manual Moder-no. México DF.3. Dellmann, H.D.; E.M. Brown. 1980.Histología veterinaria. p 177-198. Ed.Acribia. Zaragoza.Rev Inv Vet Perú32J. Montenegro et al.4. Gazitua, F.J.; P. Corradini; G. Ferrando;L.A. Raggi; V.H. Parraguez. 2001.Prediction of gestational age by ultrasonicfetometry in llamas (Lama glama) andalpacas (Lama pacos). Anim. Reprod.Sci. 66: 81-92.5. Jubb, K.V.F.; P.C. Kennedy; N.Palmer. 1993. Pathology of domesticanimals. 4th  ed. Vol. 3. p 209-211.Academic Press. California, USA.6. Junqueira, L.C.; J. Carneiro. 1988.Histología básica. 3ra ed. p 285-306. Ed.Salvat. Barcelona.7. Osburn, B.I.; N.J. MacLachlan; T.G.Terrel. 1982. Ontogeny of the immunesystem. J.A.V.M.A. 181: 1049-1051.8. Romano, N.; M. Fanelli; G. Maria delPapa; G. Scapigliati; L. Mastrolia.1999.  Histological and cytologicalstudies on the developing thymus ofsharpsnout seabream, Diploduspuntazzo. J. Anat. 194: 39-50.9. Sainte-Marie, G.; F.S. Peng; D.Marcoux. 2005. The stroma of thethymus of the rat: morphology and antigendiffusion, a reconsideration. Am. J. Anat.177: 333-352.10. Schultz, R.D.; H.W. Dunne; C.E.Heist. 1973. Ontogeny of the bovineimmune response. Infect. Immun. 7: 981-991.11. Tizard, I.R. 2002. Inmunología veteri-naria. 6ta ed. p 74-89, 227-239, 470-484.McGraw-Hill Interamericana. MéxicoDF.12. Vicente, A.; A. Varas; R. Sacedón; A.G.Zapata. 1998.  Histogenesis of theepithelial component of rat thymus: anultrastructural and immunohistologicalanalysis. Anat. Rec. 244: 506-519.

CARACTERIZACIÓN HISTOLÓGICA DEL TIMO EN FETOS DE ALPACA

Revistas de investigacion UNMSM

26Rev Inv Vet Perú 2006; 17 (1): 26-321 Práctica privada. E-mail: jubevet76@walla.com2 Laboratorio de Histología, Embriología y Patología, FMV–UNMSM3 E-mail: nieves_1@mixmail.com4 Laboratorio de Microbiología y Parasitologìa Veterinaria, FMV-UNMSMCARACTERIZACIÓN HISTOLÓGICA DEL TIMOEN FETOS DE ALPACAJuan Montenegro B.1, Nieves Sandoval Ch.2,3, Alfonso Chavera C.2 yAlberto Manchego S.4ABSTRACTThe objective of the present study was to study the cytoarchitectural structure ofthe cervical and thoracic segments of thymus in alpaca (Lama pacos) fetuses. For thispurpose, 10 fetuses between 40-190 days of gestation were collected form the localslaughterhouse. At day 40, the developing thymus has acinar cytoarchitecturalmorphology, infiltrated by a few lymphoid cells surrounded by mesenchymal cells. Atday 60, the cervical segment looks like a «follicular» lymphoid, densely populated bythymocytes, whereas the thoracic region has a cystic appearance with short trabecularprojections. Cortex and medulla differentiation starts in the posterior cervical and thoracicsegments by day 100 and in the anterior cervical segments by day 130, and is wellestablished by day 165. The thymic capsule remained as a double cellular layer of laxconnective tissue. Subcapsular and trabecular blood vessels have fenestratedendothelium. Erythroblastic cells were observed by day 100 in the cortex and subcapsulezones. Medullar Hassall’s corpuscles were observed by day 100, and the epithelial reticularcell barrier in the cortical medullar zone was observed by day 130.Key words: alpaca, fetus, thymus, Hassal corpuscleRESUMENEl objetivo del presente trabajo fue el estudio citoarquitectural de los segmentoscervicales y torácicos del timo en fetos de alpaca (Lama pacos). Se recolectaron 10 fetosentre 40 y 190 días de desarrollo para ser sometidos a estudio histológico. A los 40 días,el esbozo del timo tiene una morfología citoarquitectural de tipo acinar infiltrado porescasas células linfocíticas y rodeado por células mesenquimales. A los 60 días, el seg-mento cervical se presenta como un “folículo” linfoide densamente poblado por timocitos,mientras que la región torácica tiene una apariencia cavitaria con proyecciones trabecularescortas. La diferenciación de corteza y médula se inicia en los segmentos cervicales pos-teriores y torácicos a los 100 días y en los  segmentos cervicales anteriores a los 130 días.Todos los segmentos presentan disposición lobulillar bien definidos en corteza y médulaa los 165 días. La cápsula tímica se mantiene principalmente como una doble capa celularcon tejido conjuntivo laxo. Los vasos sanguíneos subcapsulares y trabeculares presen-tan endotelio fenestrado. Las células eritroblásticas se ubican en las zonas subcapsulares27Rev Inv Vet PerúCaracterización histológica del timo en fetos de alpacasy corticales periféricas desde los 100 días. La barrera hematotímica comienza a organizar-se desde los 60 días. Los corpúsculos medulares de Hassal son evidentes a los 100 díasy la barrera celular reticular epitelial en la zona corticomedular se encuentra desde los 130días.Palabras clave: alpaca, feto, timo, timocito, corpúsculo de HassalINTRODUCCIÓNLa alpaca (Lama pacos), especie nati-va y de gran potencial económico en el Perú,es susceptible a múltiples agentes patógenos,especialmente en hatos con inadecuados ni-veles tecnológicos de crianza.La respuesta frente a un agente pató-geno es dado por el sistema inmunológico,siendo el timo un órgano inmune primario quecumple un rol central en el sistema inmune.Allí, las células linfoides de la línea T puedandesarrollar, proliferar, madurar, generar surepertorio de receptores de antígenos, y de-jar este órgano para poblar órganos linfoidessecundarios (Romano et al., 1999). La es-tructura histológica del timo y la ontogeniadel sistema inmune ha sido estudiada y esta-blecida en la mayoría de especies domésti-cas (Osburn et al., 1982; Tizard, 2002); sinembargo, no se dispone de estudios en fetosde camélidos sudamericanos.El objetivo del presente estudio fue ca-racterizar histológicamente el desarrollo deltimo en la etapa fetal de la alpaca, estable-ciendo los tipos celulares que lo conformandurante su desarrollo estructural e infiriendola probable función inmunológica que puedaefectuar en la etapa fetal.MATERIALES  Y MÉTODOSSe emplearon 10 fetos de alpacas en-tre 40 y 190 días de edad gestacional, prove-nientes de hembras de descarte que fueronsacrificadas en un camal de la ciudad deHuancayo, Junín. La zona se encuentra a3,350 msnm.La edad gestacional fue determinadautilizando como referencia el diámetrobiparietal fetal (Gazitua et al., 2001), medidoa través de un caliper Pretul de 5”. Los fetosfueron extraídos de las bolsas amnióticas yfijados de inmediato en formol bufferado al10%.La obtención del tejido tímico se realizóen base a los siguientes criterios:- En fetos mayores de 4 meses el timo, sediseccionó in situ, obteniéndose seccio-nes de tejido de la porción cervical ytorácica.- En fetos menores de 4 meses, se hicie-ron cortes o secciones transversales alo largo del cuello y entrada del tórax.La descripción histológica del desarro-llo embriológico del timo se hizo en seis gru-pos etáreos: 40, 60, 100, 130, 165 y 190 díasde edad fetal aproximada (los últimos 4 gru-pos estuvieron compuestos por 2 fetos).Las muestras se sometieron a técnicashistológicas de rutina y se emplearon 4tinciones: Hematoxilina Eosina para la distri-bución de parénquima y estroma, Massonpara la distribución de las fibras colágenas,Wilder para la distribución de las fibrasreticulares, y Jonson para observar los grá-nulos de los mastocitos.Rev Inv Vet Perú28J. Montenegro et al.RESULTADOSEl timo, a los 40 días de desarrollo em-briológico, se presenta como una organizaciónde células reticulares epiteliales poliédricas denúcleos basófilos a manera de cordones yacinos, tomando una apariencia glandular (Fig.1). Se observan células esféricas con núcleospequeños y escaso citoplasma, compatiblescon células linfoides (timocitos), dispuestasdentro y entre los cordones o rosetas a niveldel timo torácico.A la edad de 60 días, el timo se observacomo una estructura “folicular” densamentepoblada por timocitos en los segmentos cervi-cales (Fig. 2), mientras que se muestra unaorganización seudolobulillar indiferenciada,aparentando un “órgano cavitario” en el seg-mento torácico (Fig. 3). Dentro de éstas “ca-vidades tímicas” no existe organización celu-lar definida, encontrándose los timocitos y lascélulas reticulares epiteliales dispuestosaleatoriamente, así como múltiples tipos celu-lares inmaduros de la línea mieloblástica, ade-más de abundantes vasos sanguíneos tortuo-sos y pletorizados.A la edad de 100 días, la estructura“folicular” de los segmentos tímicos cervica-les muestra una tenue diferenciación medular.Están cubiertos por una cápsula compuestapor doble capa de tejido conjuntivo laxo y doscapas celulares de fibroblastos (Fig. 4). Laestructura seudolobulillar del segmentotorácico se encuentra diferenciada en corte-za y médula. La corteza está tapizada porcélulas reticulares epiteliales limitantes y enla zona medular se aprecian macrófagos (Fig.5) y  corpúsculos de Hassal (Fig. 6). Estosson cuerpos acidófilos que constituyen célu-las reticulares epiteliales aplanadas y frecuen-temente hialinizadas, dispuestas alrededor deuna zona central constituída por una o variascélulas queratinizadas (pigmentos basófilos)y/o degeneradas. En las zonas trabeculares ysubcapsulares se encontraron algunos gruposde células eritroblásticas. Así mismo, la barre-ra hemato-tímica se encuentra definida.A la edad fetal de 130 días, tanto la es-tructura seudolobulillar de la sección cervi-cal como la estructura lobulillar de la sec-ción torácica están diferenciadas en cortezay médula. Las células reticulares epitelialesde la zona corticomedular se encuentran es-trechamente relacionadas conformando unabarrera celular que divide corteza y médula(Fig. 7). Los corpúsculos de Hassal de lamédula son evidentes. En las zonassubcapsulares y trabeculares  se observa untipo celular granular (mastocito).Las secciones cervical y torácica pre-sentan como una estructura lobulillar dife-renciada en corteza y médula a los 165 díasde desarrollo fetal. En las zonassubcapsulares y trabeculares se encuentranabundantes y variados tipos celulares de lalínea mieloide y eritroblástica.La estructura de ambas secciones a los190 días es similar a la observada a los 165días, con la salvedad de que en algunas zo-nas de la sección torácica, la cápsula se hacemás fina presentando una sola capa celular.En las áreas subcapsulares y trabecularesse encuentran, dentro los tipos celulares dela línea mieloide, grupos de célulaseritroblásticas (Fig. 8) y otras compatiblescon células plasmáticas.La medida diametral de los timocitosmedulares es mayor que de los corticales(Cuadro 1). Los timocitos medulares presen-tan un núcleo más grande y de mayor conte-nido citoplasmático.DISCUSIÓNEl esbozo del timo en los fetos dealpacas se hizo visible a los 40 días de edad,similar a lo descrito en el feto bovino (Schultzet al., 1973), a pesar que las alpacas tienenun periodo de gestación más largo (11 me-ses). Las formaciones celulares a manerade acinos glandulares, cordones o rosetas fuesimilar a lo descrito para animales domésti-29Rev Inv Vet PerúCaracterización histológica del timo en fetos de alpacasFigura 1. Feto de 40 días. Esbozo del timo rodea-do por células mesenquimales (m), célulasreticulares epiteliales como cordones y acinos (A)rodeados por vasos con eritrocitos (E). H.E. 400xFigura 2. Feto de 60 días. Corte transversal de laregión cervical anterior. Primordio de esófago(E), traquea (T), timo (®). H.E. 50xFigura 3. Feto de 60 días. Corte longitudinal dela región torácica. Timo con apariencia cavitaria.Vasos sanguíneos y trabéculas formando seudolobulillos. H.E. 100xFigura 4. Feto de 100 días. Sección craneal.Bicapa capsular (B) cubriendo la corteza tímica(C). Vaso sanguíneo con endotelio fenestrado(Vc). H.E. 400xFigura 5. Feto de 100 días. Sección torácica. Zonacortical con timocitos (T), células reticulares epite -liales corticales (R) y macrófagos (®). H.E. 1000xFigura 6. Feto de 100 días. Sección torácica. Cor-púsculo de Hassal (CH) en zona medular. Célu-las reticulares degeneradas con pigmento basó-filo (Pc) y con sustancia anhista (SA). H.E. 1000xRev Inv Vet Perú30J. Montenegro et al.Figura 7. Feto de 130 días. Células reticularesepiteliales (R) dispuestas en fila conformandouna barrera en la zona corticomedular. Vaso san-guíneo corticomedular (Vc) con endoteliofenestrado («). H.E. 1000xFigura 8. Feto de 190 días. Sección cervical an-terior. Zona subcapsular mostrando agrupamien-to de células eritroblásticas (Eb) que presentannúcleo básofilo prominente con nucleolos yacidofilia citoplasmática. H.E. 1000xCuadro 1. Medida diametral del timocito en corteza y médula tímica en 4 etapas del crecimiento fetal. Edad Fetal  (días) Corteza (µm ± d.e.) Médula (µm ± d.e.) 100 3.7 ± 0.5 4.6 ± 0.7 130 3.7 ± 0.5 4.5 ± 0.6 165 4.3 ± 0.5 4.7 ± 0.6 190 4.2 ± 0.5 5.1 ± 0.7 cos (Jubb et al., 1993), donde el componenteepitelial reticular es desplazado caudalmenteen el cuello e invade el intersticio mediastínicocon yemas tipo roseta irregulares y sólidasque crecen para formar los lóbulos primor-diales. Los linfocitos (timocitos) que se ob-servan a los 40 días en la alpaca son igual-mente observados en el timo fetal bovino(Osburn et al., 1982) y ovino (Jubb et al.,1993) en edades similares.Se presume que éstas células son lasprimeras células pro timocitos (linfoblastos)que están siendo reclutadas desde órganoshematopoyéticos fetales hacia el timo primi-tivo para poblarlo, comenzar el proceso demaduración tímico y dar origen a los prime-ros linfocitos T.El desarrollo temprano del sistemalobular primitivo, donde las células reticularesepiteliales que forman las yemas tipo rosetasse estratifican tomando formas sólidas inicial-mente y luego se hacen císticas como, al pa-recer, sucede en el timo fetal de alpaca, hasido descrito por Jubb et al. (1993). La inva-sión vascular se presentó previo a la forma-ción de lóbulos con componentes medularesy corticales, tal como ha sido reportado en laliteratura (Banks, 1992).La cápsula tímica, a partir de los 100días, está conformada por una capa externaque cubre la periferia del lóbulo tímico y unacapa interna que delimita el contorno perifé-rico de la corteza del lóbulo (Sainte-Marie et31Rev Inv Vet PerúCaracterización histológica del timo en fetos de alpacasal., 2005), similar a lo encontrado en el pre-sente estudio. Además, en el timo fetal de laalpaca se encuentran abundantes vasos san-guíneos subcapsulares pletorizados deendotelio plano fenestrado, así como célulasde la línea blanca y roja. En la rata neonatalocurre un patrón similar, donde los leucocitosse encuentran próximos a los capilaressubcapsulares y participan en acontecimien-tos tímicos peculiares, tales como el recluta-miento de células precursoras sanguíneas(Sainte-Marie et al., 2005).Diferencias morfológicas entre timo-citos, donde los corticales fueron más peque-ños que los medulares, se describen en otrasespecies como los humanos (Junquera et al.,1988) y la brema del mar (Romano et al.,1999).Los macrófagos que se observan des-de los 60 días en los fetos de alpaca cumpli-rían la función de remoción de los cuerposapoptósicos, aunque no se pudo determinarestos cuerpos. En el timo fetal se pudo apre-ciar la unión corticomedular como una ba-rrera de células reticulares epiteliales dispues-tas secuencialmente próximas entre sí. Allí,según Abbas et  al. (2002), ocurriríaninteracciones físicas con las célulasreticulares epiteliales durante la migración delos timocitos a través de la unióncorticomedular.La porción torácica del timo se organi-za a partir de la edad fetal de 100 días en lo-bulillos con corteza definida que compartenuna médula común, donde la presencia delcorpúsculo medular de Hassal es evidente.Estos corpúsculos aparecen más tardíamen-te que en el feto bovino donde ocurre a los65 días (Schultz et al., 1973). Tales corpús-culos se observaron de manera similar a lodescrito por Banks (1992) y Dellmann yBrown (1980).En el timo fetal de alpaca se apreciangrupos celulares hematopoyéticos indiferen-ciados, formando nidos compatibles con cé-lulas eritroblásticas. Tienen núcleo esféricobasófilo intenso, con presencia de nucleolosy citoplasma acidófilo, y una proporción denúcleo a citoplasma de 6:1. Estas células seubican en las cavidades del timo inmaduro de60 días, pero a partir de que el timo se organi-za, sus cavidades se pueblan de timocitos,definiéndose la corteza y médula. Las célulasse ubican principalmente en las áreastrabeculares, subcapsulares, y ocasionalmen-te en la corteza periférica. Vicente et al. (1998)reportan que el parénquima cortical del timode rata hospeda una eritropoyesis transitoriaalrededor del nacimiento. Esto indicaría que eltimo fetal de alpaca también estaría cumplien-do alguna función eritropoyética aislada.CONCLUSIONES· El desarrollo citoarquitectural del timofetal de alpaca sigue un patrón similar alde otras especies de rumiantes domésti-cos.· El rudimento tímico está presente a laedad de 40 días, definiéndose en cortezay médula a la edad de 100 días en lossegmentos cervicales posteriores ytorácicos y a los 130 días de edad en losdemás segmentos.· Los corpúsculos de Hassal se encuen-tran en la médula tímica a partir de los100 días de edad.· El timo fetal de alpaca alberga algunosnidos celulares eritroblásticos.LITERATURA CITADA1. Abbas, A.K.; A.H. Lichtman; J.S.Pober. 2002. Inmunología celular ymolecular. 4ta ed. p 129-165. McGraw-Hill Interamericana. Madrid.2. Banks, J. 1992. Histología veterinariaaplicada. p 399-415. Ed. Manual Moder-no. México DF.3. Dellmann, H.D.; E.M. Brown. 1980.Histología veterinaria. p 177-198. Ed.Acribia. Zaragoza.Rev Inv Vet Perú32J. Montenegro et al.4. Gazitua, F.J.; P. Corradini; G. Ferrando;L.A. Raggi; V.H. Parraguez. 2001.Prediction of gestational age by ultrasonicfetometry in llamas (Lama glama) andalpacas (Lama pacos). Anim. Reprod.Sci. 66: 81-92.5. Jubb, K.V.F.; P.C. Kennedy; N.Palmer. 1993. Pathology of domesticanimals. 4th  ed. Vol. 3. p 209-211.Academic Press. California, USA.6. Junqueira, L.C.; J. Carneiro. 1988.Histología básica. 3ra ed. p 285-306. Ed.Salvat. Barcelona.7. Osburn, B.I.; N.J. MacLachlan; T.G.Terrel. 1982. Ontogeny of the immunesystem. J.A.V.M.A. 181: 1049-1051.8. Romano, N.; M. Fanelli; G. Maria delPapa; G. Scapigliati; L. Mastrolia.1999.  Histological and cytologicalstudies on the developing thymus ofsharpsnout seabream, Diploduspuntazzo. J. Anat. 194: 39-50.9. Sainte-Marie, G.; F.S. Peng; D.Marcoux. 2005. The stroma of thethymus of the rat: morphology and antigendiffusion, a reconsideration. Am. J. Anat.177: 333-352.10. Schultz, R.D.; H.W. Dunne; C.E.Heist. 1973. Ontogeny of the bovineimmune response. 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CARACTERIZACIÓN HISTOLÓGICA DEL TIMO EN FETOS DE ALPACA

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