Expressão de genes de baixa penetrância no prognóstico do cancro da mama

Abstract

O cancro da mama é uma patologia de grande impacto na população feminina, devido à grande incidência, prevalência e morbimortalidade a que está associada. O património genético representa um papel importante nesta entidade nosológica. No entanto, mutações que conferem alto risco para esta doença, apenas explicam uma diminuta porção dos casos. Genes de baixa penetrância evidenciam um importante papel na suscetibilidade e têm sido alvo de estudo nas diversas populações. Trabalhos desenvolvidos pelo nosso grupo, na população que o Centro Hospitalar Cova da Beira abrange, apontaram para uma associação entre polimorfismos de genes de baixa penetrância e cancro da mama. São eles “CYP19A1 Trp39Arg (T/C)”, “GSTT1 null” e “GSTM1 null”. Realizámos um trabalho do tipo caso-controlo, em que abordámos uma amostra de 37 mulheres pertencentes à população do Centro Hospitalar Cova da Beira. Foi estudado se os 3 polimorfismos (“CYP19A1 Trp39Arg (T/C)”, “GSTT1 null” e “GSTM1 null”) apresentam diferentes níveis de expressão, entre mulheres com diagnóstico de cancro da mama, mas com prognóstico distinto. Focámo-nos assim em dois principais parâmetros, “Estadio clínico” e “Envolvimento ganglionar regional”. Neste trabalho de investigação foram utilizadas amostras de tecido de mama fixadas e incluídas em parafina. A técnica usada para quantificar a expressão génica foi PCR em tempo real. Para a análise estatística recorreu-se ao teste de qui-quadrado de Pearson e a testes não paramétricos. Para calcular as diferenças na expressão foi utilizado o método comparativo de CT, 2-??CT. Os resultados obtidos, para os polimorfismos de GSTT1 e GSTM1, foram influenciados pela diminuta quantidade de RNA extraída do tecido em parafina. Contudo, apesar da difícil extração de RNA, obteve-se uma elevada eficácia nas metodologias laboratoriais que dependeram deste procedimento, cerca de 81,1%. No que concerne ao polimorfismo CYP19A1 Trp39Arg, detetou-se expressão em cerca de 36,7% dos casos estudados. Após validarmos os resultados obtidos verificámos que a expressão entre 2 grupos de diferente estadio clínico é distinta. O grupo com “Estadio III” expressa 4,33 vezes mais CYP19A1 Trp39Arg que o grupo no “Estadio I e II”, sendo que a presença ou ausência dos Recetores de estrogénio tem que ser considerada para a correta interpretação dos resultados. Especulamos que a expressão deste polimorfismo da aromatase poderá ter algum tipo de impacto na determinação do prognóstico do cancro da mama, nesta população estudada.Breast cancer is a pathology with great impact in female population, because it is associated with considerable incidence, prevalence, morbidity and mortality. Genetic heritage represents an important role in this nosological entity. However, mutations that confer high risk of developing this disease only explain a small proportion of the cases. Low penetrance genes are an important susceptibility factor and are being the target of several studies in populations. Research accomplished by our group within the population that Centro Hospitalar Cova da Beira covers, pointed to an association between low penetrance genes polymorphisms and the risk of breast cancer. These polymorphisms are “CYP19A1 Trp39Arg (T/C)”, “GSTT1 null” and “GSTM1 null”. We conducted a case-control study in a sample of 37 women belonging to the population covered by Centro Hospitalar Cova da Beira. Our main goal was to determine if the 3 polymorphisms (“CYP19A1 Trp39Arg (T/C)”, “GSTT1 null” and “GSTM1 null”) have different expression levels, between women diagnosed with breast cancer, but with distinct prognoses. Our focus was based in two main parameters, “Clinical staging” and “Regional lymph node involvement”. In this research work we used paraffin embedded tissues of breast. Expression quantification was accomplished by Real Time PCR. Statistical analysis was performed recurring to the Pearson’s chi-squared test and nonparametric tests. To estimate expression levels differences we used the CT comparative method, 2-??CT. GSTT1 and GSTM1 results were influenced by small RNA quantities extracted from the paraffin embedded tissues. Nevertheless, despite difficult RNA extraction, we obtained a high efficacy in the laboratory methodologies depending on this procedure, about 81.1%. Regarding CYP19A1 Trp39Arg expression, 36.7% of the studied cases were detected. After result validation we noticed that this expression was different between two groups of distinct clinical staging. “Stage III” expresses 4.33 more CYP19A1 Trp39Arg than “Stages I and II”, being aware that the presence or absence of the Estrogen receptor has to be considered to interpret the results correctly. We speculate that this aromatase polymorphism expression may have some kind of impact in the determination of breast cancer prognoses in the studied population