As proteínas membranares constituem cerca de 20 a 30 % de todas as proteínas codificadas
pelo genoma de vários organismos. Elevadas quantidades de proteínas num estado de elevada
pureza são necessárias quer para estudos farmacológicos, quer para estudos cristalográficos,
daí a imperativa necessidade de desenvolver novos sistemas para a sobre-expressão
heteróloga de proteínas membranares. Especificamente, nós testámos a aplicação de
Brevibacillus choshinensis para a biosíntese da isoforma membranar da catecol-Ometiltransferase
humana. No que diz respeito ao processo de produção, obteve-se uma
moderada a elevada expressão num meio complexo com um valor de 45 nmol/h/mg para a
actividade biológica da hMBCOMT, atingida às 20 horas de cultura a 37 ºC e 250 rpm. No que
diz respeito à solubilização da proteína alvo, a eficiência de reconstituição para a hMBCOMT é
nula na presença de detergentes iónicos tais como o SDS. No entanto, a aplicação de baixas
concentrações de detergentes não-iónicos parece ser ideal para solubilizar a fracção
membranar visto que a hMBCOMT recombinante retém elevados valores para a actividade
biológica. Dos detergentes testados, a digitonina a 0.5 % (m/v) parece ser o mais adequado.
De facto, o método descrito nesta tese é simples e poder-se-á tornar muito útil se aplicado
num diagrama global para o isolamento da MBCOMT tendo em vista a sua caracterização
bioquímica ou biofísica, onde se destaca a determinação da sua estrutura por cristalografia de
raios-X ou estudos de interacção da hMCOMT com inibidores
