Étude comparative de la phosphorylation in vitro des protéines membranaires de fibroblates d'embryons de poulets normaux et transformés par le virus du sarcôme de Rous

Abstract

Nous avons étudié la phosphorylation in vitro de protéines membranaires chez des fibroblastes d'embryons de poulets normaux et transformés par le virus du sarcôme de Rous, Pour ce faire, nous avons utilisé un mutant thermosensible ts 68 pour infecter les cellules: à la température permissive (36°C), les cellules sont transformées et à 41°C (température non-permissive), les cellules présentent un phénotype normal. Nous avons d'abord établi les conditions expérimentales pour obtenir une réaction de phosphorylation in vitro optimale. Ces études ont démontré que la majorité des protéines membranaires des cellules normales et transformées par RSV étaient phosphorylées in vitro. L'addition de nucléotides cycliques, tels que l'AMPc, le GMPc et le (BU)2 AMPc, semblait stimuler la phosphorylation des protéines membranaires des cellules normales de façon plus marquante que chez les cellules transformées par RSV. La seule différence dans le profil de phosphorylation sur gel de SDS-polyacrylamide concernait une protéine, située au niveau de la bande 8: celle-ci était phosphorylée chez les cellules transformées et non chez les cellules normales. Une étude de changement de température ("Time Course") nous a permis de préciser le moment d'apparition de la phosphorylation de la protéine 8: celle-ci apparaît précocement lors de la transformation c'est-à-dire entre 3 et 8 heures après le changement à 36°C. Finalement, nous avons démontré que la phosphorylation de cette protéine 8 n'était pas due à la transformation, mais plutôt au fait que les cellules étaient dans un état de croissance très rapide