Chaves, Maria Luiza Morais Barreto de

Innocente, Adrine Maria

Pochmann, Daniela

Portuguese

Lume 5.8

Ciências Biológicas   426 302 CARACTERIZAÇÃO PARCIAL DA HIDRÓLISE DE ATP, ADP E AMP EM FRAÇÃO MICROSSOMAL CARDÍACA DE RATOS ADULTOS. Adrine Maria Innocente, Daniela Pochmann, Maria Luiza M Barreto-Chaves, Joao Jose Freitas Sarkis (orient.) (UFRGS). Os nucleotídeos extracelulares ATP, ADP, AMP e adenosina possuem um importante papel no sistema cardiovascular principalmente relacionado à trombose e inflamação. No coração, eles estão envolvidos na contração, em efeitos cronotrópicos e arrítmicos. Diversas enzimas são capazes de hidrolisar os nucleotídeos da adenina modulando a sinalização purinérgica, entre elas as NTPDases e a 5´nucleotidase. O objetivo do presente estudo é caracterizar as enzimas envolvidas na hidrólise de ATP, ADP e AMP em microssomas cardíacos de ratos adultos. A fração microssomal foi obtida através de centrifugações diferenciais do homogeneizado dos ventrículos. A preparação foi pré-incubada por 10 minutos a 37ºC e a reação foi iniciada pela adição de ATP, ADP ou AMP a uma concentração final de 2mM. A reação foi parada pela adição de ácido tricloroacético 10%. A quantidade de Pi liberado foi medida pelo método de Chan et al, 1986. A concentração de proteína e o tempo de incubação foram escolhidos para assegurar a linearidade da reação. A proteína foi medida de acordo com o método de Bradford, 1976. Para o ensaio com ATP, foram usados 20μg de proteína por tubo e 2 minutos de incubação. Para o ensaio com ADP e AMP foram usados 50μg de proteína por tubo e 10 minutos de incubação. O inibidor de ATPase mitocondrial (oligomicina, 2μg/mL) foi usado em todo os ensaios enzimáticos com ATP e ADP e o inibidor de adenilato quinase (NEM, 4mM), foi usado em todos os experimentos com ADP. Nossos resultados demonstram atividade de hidrólise de ATP, ADP e AMP em microssomas cardíacos de ratos. Ambas as enzimas (NTPDase e 5´nucleotidase) foram cátion-dependentes e mostraram uma preferência pelo íon Mg2+. O estudo do metabolismo destes nucleotídeos modulando a razão nucleotídeo/nucleosídeo no coração pode ser importante para entender os processos relacionados com a sinalização destas moléculas no sistema cardiovascular.  

Caracterização parcial da hidrólise de ATP, ADP e AMP em fração microssomal cardíaca de ratos adultos

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