Contributions to formulation of the strategies for genetic investigation of syndromic orofacial clefts

Abstract

Orientadores: Vera Lúcia Gil da Silva Lopes, Isabella Lopes MonlleóTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: Este estudo descreve características clínicas e genéticas de indivíduos com formas sindrômicas de fendas orais típicas (FOT) oriundos de seis serviços integrantes do Projeto Crânio-face Brasil (PCFB). A amostra foi constituída de 73 casos registrados na Base Brasileira de Anomalias Craniofaciais sendo 66 indivíduos com FOT associada a outros defeitos major sem etiologia reconhecida e 7 casos informativos com supeita de síndromes. Informações demográficas e clínicas foram obtidas por meio de protocolo padronizado, aplicado nos serviços participantes (http://www.fcm.unicamp.br/fcm/cranio-face-brasil/projeto-cranio-face-brasil). Exames complementares incluíram ecocardiografia, ultrassonografia abdominal e ressonância magnética do encéfalo, utilizando a estrutura do Sistema Único de Saúde (SUS) do serviço de origem, e cariótipo com bandas G, efetuado em quatro serviços participantes do estudo. O conjunto desses dados compuseram os critérios de seleção do caso para hibridização genômica em array (aGH) utilizando as plataformas GeneChip System CytoScan 750K e HD (Affymetrix®). Os resultados foram confirmados, individualmente, por meio das técnicas de Hibridação Genômica Comparativa em array (aCGH)(plataforma Human Genome CGH Microarray Kit 4x180K, Agilent Technologies®), Single Nucleotide Polymorphism Array (SNP-array)(plataforma SNP-array 850K, Illumina®) e Hibridização in situ fluorescente (FISH) (sondas de clones BAC: RP11-35P16, RP11-27M24). Quanto à procedência, 31 (42,5%) sujeitos eram do Nordeste, 25 (34,2%) do Sul e 17 (23,3%) do Sudeste; 34 (46%) apresentavam idade inferior a um ano, sem diferenças quanto ao gênero. Recorrência familial e consanguinidade parental ocorreram em 18% e 5,6% dos casos, respectivamente. A investigação complementar foi concluída em 28 (38,4%) indivíduos, 22 dos quais foram investigados por aGH, tendo sido identificados 4 (18,24%) com CNVs patogênicas. Os resultados corroboram a eficácia da técnica de aGH na investigação etiológica em FOT sindrômica e explicitam dificuldades para realizar a investigação complementar por meio de exames básicos no SUS. Sendo estes essenciais para a correlação genótipo-fenótipo, espera-se que este estudo forneça subsídios para a formulação de estratégias de abordagem genética de indivíduos com de FOT sindrômicas no BrasilAbstract: This study describes clinical and genetic characteristics of individuals with syndromic forms of typical oral clefts (TOC) from six service members of Project skull-face Brazil (PCFB). The sample consisted of 73 cases recorded in the Brazilian Database on Craniofacial Anomalies with 66 individuals with TOC associated with other major defects without known etiology and 7 informative cases with suspicion of syndromes. Demographic and clinical information was obtained through a standardized protocol applied in the participating services (http://www.fcm.unicamp.br/fcm/cranio-face-brasil/projeto-cranio-face-brasil). Additional tests include echocardiography, abdominal ultrasound and MRI of the skull, using Unifyed System of Health (SUS) structure of the original service, and karyotyping with G bands, made in four study participants services. These data composed the case selection criteria for genomic hybridization array (aGH) by GeneChip System CytoScan 750K e HD (Affymetrix®). The results were confirmed individually by array Comparative Genomic Hibridization (aCGH)(Human Genome CGH Microarray Kit 4x180K, Agilent Technologies®), Single Nucleotide Polymorphism Array (SNP-array)(SNP-array 850K, Illumina®) and Fluorescent in situ Hibridization (FISH)(BAC clons: RP11-35P16, RP11-27M24). Considerering the referral origin, 31 (42.5%) subjects were in the Northeast, 25 (34.2%) South and 17 (23.3%) of the Southeast; 34 (46%) were younger than one year, there was no difference according to gender. Parental consanguinity and familial recurrence occurred in 18% and 5.6% of cases, respectively. A further investigation was completed in 28 (38.4%) patients, 22 of whom were investigated by aGH, 4 have been identified (18.2%) with pathogenic CNVs. The results support the effectiveness of aGH technique in the etiological investigation in syndromic TOC and explicit difficulties in carrying out further investigation through basic tests in SUS. These being essential for genotype-phenotype correlation, it is expected that this study supplies subsidies for the development of genetic approach strategies of individuals with syndromic TOC in BrazilDoutoradoGenetica MedicaDoutor em Ciências Médicas160391/2012-1CNP