Orientadores: Maria Heloisa de Souza Lima Blotta, Magnun Nueldo Nunes dos SantosDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: Introdução e objetivo: A reposta inflamatória está envolvida na patogênese de muitas complicações vistas em pacientes com anemia falciforme (AF). O objetivo deste trabalho é avaliar os níveis séricos de duas citocinas anti-inflamatórias descobertas recentes, a IL-27 e IL-37, e algumas citocinas inflamatórias em pacientes brasileiros com AF em tratamento com hidroxiureia (HU) e comparar com pacientes sem este tratamento e indivíduos controle. Além disso, demostrar o efeito da IL-27, IL-37 e heme in vitro na secreção de IL-8 por neutrófilos e monócitos humanos. Métodos: Estudo transversal com 82 pacientes com AF (35 sem tratamento com HU e 47 em tratamento com HU) com a doença estável e 49 indivíduos controle. Os dados clínicos foram obtidos por entrevista e de prontuários. Os níveis séricos de IL-27, IL-37, TGF-?, TNF-?, IL-1?, IL-6 e IL-8 foram dosados por ELISA. Neutrófilos e monócitos foram isolados de indivíduos saudáveis e cultivados separadamente com ou sem citocinas (IL-27 e IL-37) e heme. As citocinas pró inflamatórias no sobrenadante de cultura foram detectadas por ELISA. Resultados: Os níveis plasmáticos de IL-27, IL-37, IL-1?, IL-6 e IL-8 em pacientes em tratamento com HU estão significativamente elevados em comparação a controles HbAA. Não houve diferença nos níveis séricos de citocinas pró e anti-inflamatórias, exceto IL-8, em pacientes tratados com HU comparados a indivíduos controles. IL-27 e IL-37 estão correlacionadas positivamente em pacientes HbSS com e sem tratamento com HU. A produção de IL-8 in vitro por neutrófilos e monócitos pré tratados com IL-27 e IL-37 foi significativamente inibida apesar da adição de heme. Conclusão: Nossos achados demonstram que a IL-27 e IL-37 estão elevadas em pacientes com AF sem tratamento com HU. As citocinas IL-27 e IL-37 podem exercer um papel regulatório nas vias pró inflamatórias, como sugerido pelos experimentos in vitro. Este papel é provavelmente suficiente em prevenir posteriores danos celulares e teciduais, mas não potente o suficiente para prevenir inflamação. Assim, IL-27 e IL-37 podem ser potenciais alvo imunes para melhorar as complicações associadas com elevação do heme como visto em AF e outras anemias hemolíticasAbstract: Background and objective: Inflammation has been implicated in the pathogenesis of most complications seen in Sickle cell anemia (SCA) patients. This project aimed to evaluate serum levels of two newly discovered anti-inflammatory cytokines IL-27 and IL-37 and some pro-inflammatory cytokines among Brazilian SCA patients that are hydroxurea-naive and compared with hydroxyurea-treated patients and HbAA controls. Furthermore, to demonstrate the effect of IL-27, IL-37 and heme on in vitro secretion of IL-8 in human neutrophils and monocytes. Methods: It is a cross-sectional study of 82 consenting SCA (35 hydroxyurea-naïve HbSS and 47 hydroxyurea-treated HbSS) patients in steady state and 49 HbAA consenting individuals. Their clinical details were obtained by interview and from patients¿ records. The serum levels of IL-27, IL-37, TGF-?, TNF-?, IL-1?, IL-6 and IL-8 were quantified by ELISA. Neutrophils and monocytes were isolated from healthy controls, cultured separately without or with cytokines (IL-27 and IL-37) and heme. The pro-inflammatory cytokines in the supernatant were detected by ELISA, Results: Serum levels of IL-27, IL-37, IL-1?, IL-6 and IL-8 in hydroxyurea- naïve SCA patients were significantly elevated compared to HbAA controls There was no significant difference in the serum levels of both anti- and pro-inflammatory cytokines except IL-8 in the HU-treated SCA patients compared to controls. IL-27 and IL-37 were positively correlated in both HU-naive and hydroxyurea-treated HbSS patients. In vitro IL-8 production by IL-27 and IL-37 pre-treated neutrophils and monocytes was significantly inhibited despite addition of heme. Conclusions: Our findings show that IL-27 and IL-37 are elevated in HU-naïve patients. The study support that the use of HU did not significantly alter serum levels of anti- and pro-inflammatory cytokines except IL-8 in SCA patients. IL-27 and IL-37 may play a regulatory role on the pro-inflammatory pathways, as suggested by the in vitro studies. This role is probably sufficient to prevent further cellular or tissue damage but not potent enough to prevent inflammation. Thus, IL-27 and IL-37 may be potential immuno-targets to ameliorate complications associated with elevated heme as seen in SCA and other hemolytic anemiasMestradoPatologia ClinicaMestre em Ciências Médicas400005/2013-1CNP
