Orientadores: Jaime Aparecido Cury, Altair Antonina Del Bel CuryTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: Sacarose é o carboidrato mais cariogênico da dieta, mas na presença do amido esta cariogenicidade pode ser potencializada provocando maior desmineralização na estrutura dental. Entretanto, resultados conflitantes têm sido encontrados em relação ao potencial cariogênico da associação amido+sacarose para dentina, o que pode estar relacionado com diferenças nos modelos de estudo usados. A maioria dos experimentos in vitro que avaliaram a cariogenicidade de produtos amiláceos foram realizados com modelo de biofilme de S. mutans, não composto por bactérias implicadas com o metabolismo direto ou indireto do amido. No presente estudo, nós expandimos o conhecimento sobre este assunto utilizando um modelo de biofilme composto por S. mutans (Sm), S. gordonii (Sg) e A. naeslundii (An). Sm é a bactéria bucal mais cariogênica, o An possui atividade amilolítica e Sg por ser colonizador inicial que expressa uma proteína que liga ?¿amilase, enzima salivar indispensável para o metabolismo do amido na cavidade bucal. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da associação amido+sacarose na desmineralização da dentina radicular, utilizando esse modelo de biofilme tri-espécie, contemplando a atividade da amilase salivar. Foi realizado estudo in vitro, cego, conduzido em 3 experimentos independentes com n final=18. Biofilmes de Sm+Sg+An foram crescidos sobre blocos de dentina radicular bovina (7x4x1 mm), cujas durezas de superfície foram previamente determinadas. Biofilme foram crescidos em meio de cultura a base de triptona e extrato de levedura contendo glicose 0,1 mM, os quais foram expostos a 4 grupos de tratamentos: NaCl 0,9% (controle negativo), amido 1%, sacarose 10% ou amido 1% + sacarose 10%. Os tratamentos foram realizados por 3 min, 8 vezes/dia, durante 4 dias. Para simular o efeito da ?¿amilase, os biofilmes foram tratados (1 min) com saliva humana antes de cada exposição aos tratamentos, a qual também foi adicionada ao meio de cultura. Para avaliar a acidogenicidade dos biofilmes, o pH do meio de cultura foi determinado 2x/dia, após as 8 exposições diárias aos tratamentos e após o período noturno de jejum. Após 96 h, os biofilmes foram coletados para análises de viabilidade bacteriana, biomassa e quantidade de polissacarídeos. A desmineralização dentinária foi avaliada por porcentagem de perda de dureza de superfície (%PDS). A bioarquitetura do biofilme foi analisada qualitativamente por microscopia confocal a laser (CLSM). Os dados quantitativos foram analisados por ANOVA seguido por teste de Tukey, com nível de significância de 5%. Biofilmes expostos à amido+sacarose mostraram ser mais acidogênicos (p 0,05). Análise por CLSM sugere que biofilme exposto a amido+sacarose é mais volumoso que o do grupo sacarose. Os resultados obtidos mostram que a associação amido+sacarose é mais cariogênica para a dentina radicular que o efeito da sacaroseAbstract: Sucrose is the most cariogenic dietary carbohydrate but in the presence of starch this cariogenicity can be increased. However, conflicting results have been found about the cariogenic potential of starch + sucrose combination to dentin, which may be related to the differences in the models of evaluation used. Most in vitro experiments that evaluated the cariogenic potential of starchy products were made with S. mutans biofilm model, not composed of bacteria involved with the direct or indirect metabolism of starch. In this study, we have expanded the knowledge on this subject using a biofilm model composed of Sm is the most cariogenic oral bacteria, An has amylolytic activity and Sg is an initial colonizer that expresses a binding protein to ?-amylase, which are essential bacteria for the starch metabolism in the oral cavity. The objective of this study was to evaluate the effect of the starch + sucrose combination in root dentin using a tri-species biofilm model, contemplating the salivary amylase activity. An in vitro and blind study was conducted in three independent experiments with n total = 18. Biofilm Sm+Sg+An were grown on bovine root dentin blocks (7x4x1 mm), which surface hardnesses were previously determined. The biofilms were grown in ultrafiltered tryptone and yeast extract broth (UTYEB) containing 0.1 mM glucose and they were exposed to 4 treatment groups: 0.9% NaCl, 1% starch, 10% sucrose or 1% starch + 10% sucrose. The treatments were carried out for 3 min, 8 times per day for 4 days. To simulate the effect of ?¿amylase, biofilms were treated (1 min) with human saliva stimulated before each treatment exposure and salivary amylase was also added into the culture medium. To evaluate the biofilms acidogenicity, the culture pH of culture medium was determined 2x/day, after the 8 treatments exposure and after an overnight period. After 96 h, the biofilms were collected for analyses of bacterial viability, biomass and quantity of polysaccharides. The dentine demineralization was assessed by surface hardness loss (%SHL). The biofilm bio-architecture was qualitatively analyzed by confocal microscopy laser scanning (CLSM). The quantitative data were analyzed by ANOVA followed by Tukey's test at 5% significance level. Biofilms treated with starch + sucrose were more acidogenic (p 0.05). The CLSM analysis suggested that the biofilm formed in the presence of starch + sucrose combination is the most volumous. The findings show additional experimental evidence that starch + sucrose combination is more cariogenic for root dentine than the isolated effect of sucroseDoutoradoProtese DentalDoutora em Clínica OdontológicaCAPE
