Orientador: Jacks Jorge JuniorDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: O melanoma cutâneo é uma neoplasia maligna que apresenta alta propensão para ocorrência de metástases. Os eventos biológicos mais associados com o processo metastático são: sobrevivência, migração e invasão celular. Diversas vias sinalizadoras induzem esses processos, destacando-se o papel da ciclooxigenase 2 (COX-2) e do Fator de Crescimento Transformante Beta 1 (TGF?-1) que atuam aumentando o metabolismo celular e modulando a interação parênquima-estroma. Além disso, essas vias sinalizadoras têm sido relatadas como cruciais no desenvolvimento de metástases de outras neoplasias malignas. Assim, os objetivos desse trabalho estão divididos em três capítulos, e compreendem: (i) avaliar, por meio de análise imunohistoquímica em Tissue Microarrays (TMAs), a expressão de COX-2, p-Akt e minichromosome maintenance 2 (MCM2) em melanomas primários e metastáticos (MM), correlacionando-os com dados clínicos, histopatológicos e taxas de sobrevida; (ii) avaliar e correlacionar a expressão de TGF?-1 e endoglina (CD105) com a polarização de macrófagos (CD68, CD11c ¿ M1 e CD163 ¿ M2); (iii) analisar, in vitro, o efeito de trans-desidrocrotonina (t-DCTN), um princípio ativo extraído do Croton cajucara Benth, em células de melanoma murino. A sobrevida global dos casos analisados demonstrou correlação positiva com a expressão de COX-2, p-Akt e TGF?-1. Em MM foi observado aumento da expressão de TGF?-1 que apresentou correlação positiva com maior distribuição de macrófagos M2. O número de vasos CD105 positivos também demonstrou correlação positiva com MM e pior prognóstico. Adicionalmente, t-DCTN apresentou efeito citotóxico em todas as concentrações testadas, induzindo apoptose e necrose nas células B16F10 de maneira dose-dependente. Nas células tratadas com t-DCTN, observou-se, por meio de imunofluorescência a diminuição da expressão da metaloproteinase 9. Conclui-se que os biomarcadores COX-2, p-Akt e TGF?-1 apresentam papel biológico relevante na patogênese de MM e na progressão tumoral, destacando-se como potenciais vias específicas para tratamento destas neoplasias. A droga t-DCTN apresentou efeito citotóxico em células B16F10, porém mais estudos são indicados para definir o mecanismo de ação pelo qual essa droga atua, elucidando uma possível opção terapêutica para tratamento de melanomas metastáticos e em fases avançadasAbstract: Cutaneous melanoma is a malignant neoplasm that has a high propensity to develop metastasis. Cell survival, migration, invasion and epithelial-mesenchymal transition are biological events most associated with the metastatic process. Indeed, several signaling pathways act together and culminate with the induction of these processes, highlighting the role of cyclooxygenase 2 (COX-2) and transforming growth factor beta 1 (TGF?-1) which cause increasing cellular metabolism and modulating stromal and tumor cells interactions. Moreover, these signaling pathways have been reported to be crucial for development of metastases in other cancer types. Thus, the present study, divided into three chapters, aimed: (i) to evaluate COX-2, p-Akt1 and minichromosome maintenance 2 (MCM2) expression in primary and metastatic melanomas (MM), and to correlate with clinical, histopathological and survival rates; (ii) to evaluate and correlate TGF?-1 and endoglin (CD105) expression with the polarized macrophages (CD68 ¿ total macrophages, CD11c ¿ M1 macrophages, CD163 ¿ M2 macrophages); (iii) analyze in vitro the effect of trans-dehydrocrotonin (t-DCTN), a drug extracted from Croton cajucara Benth in murine melanoma cells (B16F10). We demonstrated that TGF?-1, CD105, COX-2, p-Akt, CD163, Ki67 and MCM2 are associated with lower specific-disease survival in primary and metastatic tumors, supporting their role in melanoma metastatic progression. Overexpression of these biomarkers and higher number of vessels CD105 positive also showed a positive correlation with MM and worse prognosis. Additionally, t-DCTN showed cytotoxic effect in all concentrations tested, induced apoptosis and necrosis in the B16F10 cells in a dose-dependent manner. In cells treated with t-DCTN, it was observed by immunofluorescence a reduction in the expression of metalloproteinase 9 (MMP-9). We conclude that the biomarkers (COX-2, p-Akt1 and TGF?-1) have important biological role in the pathogenesis of MM, and tumor progression, especially as potential specific targets for metastatic melanomas treatment. Furthermore, t-DCTN drug showed cytotoxic effect on B16F10 cells (metastatic) murine melanoma, however further studies are indicated to define the mechanism of action of this drug, elucidating a possible more effective and less toxic therapeutic option for treatment of advanced stages and metastatic melanomasMestradoPatologiaMestre em EstomatopatologiaCAPE
