Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida GomesTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: Introdução: O conteúdo infeccioso dos canais radiculares, incluindo bactérias e seus bio-produtos como o LTA (ácido lipoteicóico), e produtos derivados de genes de virulência, podem induzir a liberação de citocinas pró-inflamatórias (CPI) e metaloproteinases de matriz (MMPs) causando injuria aos tecidos periapicais. Os objetivos deste estudo foram: (Capítulo I) a) caracterizar os microrganismos Gram-positivos e estabelecer a prevalência de Enterococcus faecalis nas diferentes fases da terapia endodôntica; b) investigar a presença de LTA; (Capítulo II) c) monitorar in vivo o efeito do preparo químico-mecânico (PQM) e da medicação intracanal (MIC) na redução de bactérias cultiváveis (BC), LTA, CPI (TNF-? e IL1-?) e MMPs (-2, -3, -8, -9 e -13) em canais radiculares de dentes com periodontite apical pós-tratamento endodôntico; (Capítulo III) d) investigar a suscetibilidade antimicrobiana de E. faecalis isolados e a prevalência dos seus fatores de virulência. Metodologia: Vinte canais radiculares infectados de dentes unirradiculares foram divididos aleatoriamente em dois grupos de acordo com a substância química auxiliar (SQA) utilizada durante o PQM (n = 10 por grupo): G1 - clorexidina (CLX) 2% gel e G2 - hipoclorito de sódio (NaOCl) 6%. As amostras do conteúdo infeccioso e inflamatório dos canais radiculares foram obtidas usando cones de papel estéreis antes (C1) e após (C2) o PQM e após 30 dias com MIC (Ca[OH]2 + clorexidina 2% gel) (C3). (Capítulo I) A identificação microbiana foi realizada por testes bioquímicos; BC foram determinadas por contagem das unidades formadoras de colônia (UFC/mL); os níveis de LTA foram mensurados usando o ensaio imunoenzimático (ELISA) (pg/mL); (Capítulo II) CPIs e MMPs foram também mensuradas usando o ensaio imunoenzimático (ELISA) (pg/mL); (Capítulo III) a suscetibilidade antimicrobiana de diferentes antibióticos foi determinada pela concentração inibidora mínima (CIM) utilizando o método do E-test. Os genes de virulência (ace, asa, asa373, cylA, efaA, esp e gelE) dos E. faecalis isolados foram detectados através da técnica de PCR. Resultados: (Capítulo I) 82 espécies bacterianas Gram-positivas, de um total de 102 bactérias isoladas, foram encontradas nos canais radiculares (62 na C1, 4 na C2 e 16 na C3). Os gêneros mais prevalentes foram Actinomyces spp, Aerococcus spp, Enterococcus spp, Gemella spp and Staphylococcus spp. E. faecalis foi a bacteria mais prevalente. BC (101,2±79,2), LTA (94,1±61,7), (Capítulo II) CPI (TNF-?: 8,8±4,7 e IL1-?: 1,2±0,4) e MMPs (MMP-2: 803,7±96,4; MMP-3: 453,9±229,3; MMP-8: 245,9±122,4; MMP-9: 129,4±29,6 e MMP-13: 70,8±12,8) estavam presentes em todas as amostras (C1). Foi encontrada diminuição dos níveis globais de BC, LTA, CPI e MMPs, em todos os grupos (P 0,05). O percentual de redução na C3 foi o seguinte: BC (16,7%) (P > 0,05), LTA (39%) (P 0,05). Por outro lado, observou-se aumento de TNF-?, IL1-?, MMP-2 (P 0,05) na C3. A MIC foi efetiva na redução de LTA no G1; e BC, MMP-3 e MMP-8 no G2 (P 0.05). Reduction percentage in S3 was the following: CB (16.7%) (P > 0.05), LTA (39%) (P 0.05). On the other hand, there was an increase of TNF-?, IL1-?, MMP-2 (P 0.05) levels in S3. ICM was effective in reducing LTA in G1; and CB, MMP-3 and MM-8 in G2 (P < 0.05). However, there was an increase of all PCI and MMPs in S3 for G1 (-3, -8, -9 and -13) and G2 (-2 and -13) (P < 0.05). (Chapter III) Amoxicilin + clavulanate was effective against the all strains. Intermediate resistance of some strains was observed for Amoxicillin (5%), Azithromycin (20%), Benzylpenicillin (5%), Ciprofloxacin (15%), Doxycycline (5%), Erythromycin (75%), Tetracycline (10%) and Vancomycin (15%). A total resistance to Clindamycin (60%), Chloramphenicol (5%), Gentamicin (65%), Metronidazole (95%), Moxifloxacin (5%) and Rifampicin (10%) was observed for some strains. In relation to the virulence factors of E. faecalis isolates, there was detection of ace (100%), asa (60%), asa373 (15%), esp (70%) and gelE (75%) genes. However, cylA and efaA genes were not detected. Conclusion: (Chapters I and II) Regardless the use of NaOCl or CHX, CMP is effective in reducing the infectious/inflammatory content of the root canals of teeth with endodontic treatment failure. The MIC increased the levels of TNF-?, IL-1? and MMP-2. (Chapter III) Amoxicillin + Clavulanate showed antimicrobial activity against all strains of E faecalis tested, while some isolates showed resistance to Clindamycin, Chloramphenicol, Gentamicin, Metronidazole, Moxifloxacin and Rifampicin. All strains of E. faecalis had the genes ace, asa, asa373, esp and gelEDoutoradoEndodontiaDoutor em Clínica Odontológica33003033008P8CAPE
