Evaluation of diffusional effects on kinetics of soybean lecithin hydrolysis using A<SUB>2</SUB> phospholipase

Abstract

La Fosfolipasa A2, soluble o inmovilizada, libera un mol de ácido graso de la posición C-2 de los fosfolípidos de la lecitina de soja para producir lisolecitinas. Cuando se utiliza la enzima en su forma inmovilizada, la actividad enzimática decrece debido al fenómeno de transporte de sustrato y de producto. Se evaluaron los efectos de difusión comparando los parámetros cinéticos de la reacción de hidrólisis de lecitina de soja catalizada por fosfolipasa A2 inmovilizada sobre alúmina o sobre DEAE-Sephadex, frente a los de enzima soluble. La disminución de la velocidad de reacción fue cuantificada en presencia de efectos difusionales y se calcularon los factores de eficiencia. Se determinaron los parámetros de Michaelis-Menten: KM = 8.2.10-2 mol.l-1 y 5.36.10-2 mol.l-1 y Vmax = 7.7.10-5 mol.l-1.min-1 y 9.5.10-5 mol.l-1.min-1 para la enzima inmovilizada sobre alúmina y sobre DEAE-Sephadex, respectivamente. El factor de eficiencia fue 0.277 para alúmina y 0.376 para DEAE-Sephadex.Soluble or immobilized A2 phospholipase liberates one mole of fatty acid of the C-2 position in soybean lecithin phospholipids to product lysolecithins. When using the enzyme in its immobilized form the enzymatic activity decreases due to substrate and product transport phenomenon. By comparison of the kinetic parameters of the hydrolysis reaction catalized by A2 phospholipase immobilized on alumina or on DEAE-Sephadex against those of the soluble enzyme, for soybean lecithin hydrolysis reaction, the diffusive effects were evaluated. The decrease of the reaction rate was quantified in presence of diffusive effects and the effectiveness factors were calculated. The Michaelis-Menten kinetic parameters were determined: KM = 8,2.10-2 mol.l-1 and 5.36.10-2 mol.l-1 and Vmax = 7, 7.10-5 mol.l-1.min-1 and 9,5.10-5 mol.l-1min-1 for the enzyme immobilized on alumina and on DEAE-Sephadex, respectively. The effectiveness factors were 0,277 for alumina and 0,376 for DEAE-Sephadex.Facultad de Ciencias Exacta