بهینه سازی عوامل مؤثر در انتقال ژن به وسیله آگروباکتریوم تومه فشینس به گوجه فرنگی دوره8 شماره2 سال1388

Abstract

Abstract Tomato is a plant which has highly important nutrition, economic and scientific aspects. Due to its susceptibility to biotic and abiotic stresses, breeding through genetic engineering of this plant is an effective method for enhancement of its tolerance to stresses. In this experiment, factors influencing the transformation of cultivated tomato, were studied. The high shoot regeneration was observed in Peto earlyCH and Early urbanaY cultivars, respectively and the most transformation rate was obtained in Early urbanaY cultivar. Preculture of explants for 1 day and addition of 100 - 150 µM acetosyringone into inoculation solution had a positive effect on transformation efficency. The optimum inoculation and cocultivation time for explants was 15 minutes and 2 days respectively. Putative transgenic plants were confirmrd using PCR and specific primers of both genes (nptII and codA genes). These plants were transferred to the soil for further molecular and bioassay experiments. Keywords: Agrobacterium, Cocultivation, Preculture, Regeneration, Transformation, Tomatoچکیده گوجه فرنگی، گیاهی است که از جنبه های غذایی، اقتصادی و علمی از اهمیت بالایی برخوردار است. با توجه به اهمیت زراعی آن و حساسیت این گیاه زراعی نسبت به اغلب تنش های زیستی و غیر زیستی، نیاز به استفاده از روش های نوین در اصلاح این گیاه بیش از پیش احساس می شود. در این تحقیق عوامل مؤثر در تراریزش گوجه فرنگی زراعی مورد بررسی قرار گرفت. دو رقم پتوارلیCH و ارلی اورباناY به ترتیب بیشترین میانگین باززایی را داشتند و بیشترین میزان تراریزش در رقم ارلی اورباناY مشاهده شد. پیش کشت یک روزه ریز نمونه ها و افزودن 100 تا 150 میکرومولار استوسیرینگون به محلول تلقیح، در تراریزش گیاهان اثر مثبت داشت. بهترین زمان تلقیح ریزنمونه با باکتری 15 دقیقه و بهترین زمان برای هم-کشتی ریزنمونه ها با آگروباکتریوم، دو روز پس از تلقیح تشخیص داده شد. گیاهان تراریخته احتمالی، در محیط کشت های گزینش به خوبی رشد کردند. گیاهان تراریخته با استفاده از آغازگرهای اختصاصی هر دو ژن کولین اکسیداز آرتروباکتر (codA) و ژن نشانگر گزینشگر نئومایسین فسفوترانسفرازII (nptII) مورد تأیید قرار گرفتند. گیاهان فوق برای آزمایش های تکمیلی مولکولی و زیست سنجی به خاک انتقال یافتند. واژه های کلیدی: آگروباکتریوم، باززایی، تراریزش، گوجه فرنگی، هم کشت