松本歯科大学大学院歯学独立研究科博士（歯学）学位申請論

SHIMADA KATSUMITSU

嶋田 勝光

松本歯科大学大学院歯学独立研究科博士（歯学）学位申請論文application/pdfothe

SHIMADA, KATSUMITSU

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嶋田, 勝光

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Matsumoto Dental University Repository

〔学位論文要旨〕松本歯学 ４2：141～142，2016口腔扁平苔癬の異常角化に関与する周辺帯形成関連タンパク質の異所性局在嶋田　勝光松本歯科大学　大学院歯学独立研究科　硬組織疾患制御再建学講座（主指導教員：長谷川　博雅　教授）松本歯科大学大学院歯学独立研究科博士（歯学）学位申請論文Aberrant localization of cornified cell envelop proteins relatedto abnormal keratinization in oral lichen planusKATSUMITSU SHIMADADepartment of Hard Tissue Research, Graduate School of Oral Medicine,Matsumoto Dental University(Chief Academic Advisor : Professor Hiromasa Hasegawa)The thesis submitted to the Graduate School of Oral Medicine,Matsumoto Dental University, for the degree Ph. D. （in Dentistry）【緒言】　口腔扁平苔癬（Oral lichen planus ; OLP）はTリンパ球による上皮結合組織境界部（境界部）の傷害性病変である．病理組織学的には帯状リンパ球浸潤と基底層の液状変性に加え，しばしば角化亢進がみられる．しかし，角化異常に関する研究は乏しく，その発生機序は未だ不明である．角化には，周辺帯（Cornified cell envelope ; CE）関連タンパク質が重要な役割を担っている．そこで我々は，OLPの角化異常の機序を明らかにするため，CE関連タンパク質の局在を免疫組織学的に検索し，上皮の傷害性変化や増殖性変化との関連を統計学的に解析した．【実験材料及び方法】　両側頬粘膜の網状白斑型 OLPの20例を実験材料とし，病理学的に著変のない頬粘膜 5例を対照群とした．対照群の上皮厚径を基準に，OLP群の上皮を菲薄部と肥厚部に分類した．上皮の各層の厚径を計測し，基底層の細胞傷害の程度を G0から G3に分類して検討した．境界部の変化を確認するために CollagenⅣ（COL4），Keratin 19（K19），Desmoglein 1（DSG1），Ki─6₇ に対する一次抗体を用い，角化異常の検討のために CE関連タンパク質である Involucrin（IVL），Transglutaminase 1（TGM1），Transglutamin-ase 3（TGM3）に対する一次抗体を用いて免疫染色を行った．COL4，K19，DSG1，Ki─6₇は陽性率（陽性細胞数／一定領域の総細胞数）を，CE関連タンパク質は陰性率（下層部の陰性細胞層の厚径／上皮全層の厚径）を算出して解析した．【結果】　OLP群の上皮では菲薄部と肥厚部が混在し，肥厚部より菲薄部で傷害の程度が有意に高かった．K19と COL4陽性率は，対照群に比べ OLP松本歯学　42⑵　2016142群で有意に低下したが，肥厚部と菲薄部の差はなかった．一方，DSG1陽性率は，対照群と OLP群間に有意差はないが，OLP群の肥厚部のDSG1陽性率は菲薄部よりも有意に高かった．Ki─6₇陽性率は対照群と OLP群間，肥厚部と菲薄部間でも有意差はなかった．　IVLは対照群の有棘層下部から細胞質に陽性だが，OLP群では最下層から細胞膜に陽性であった．TGM1は対照群と OLP群の有棘層中央部から細胞膜に陽性だが，OLP群では下層部の細胞質にも陽性を示し，陰性率は対照群よりOLP群で有意に低かった．TGM3は対照群の有棘層下部から核と細胞質に陽性で，OLP群では有棘層中央部から細胞膜にも陽性を示した．陰性率は，対照群より OLP群で高い傾向だった．TGM1と TGM3の陰性率は弱い負の相関関係を示し，OLP群の肥厚部の DSG1陽性率と TGM3陰性率の間で強い負の相関がみられた．【考察】　OLP群では K19と COL4発現が減少し，境界部で傷害性変化が生じていることを確認できた．K19の減少は，上皮厚径，COL4および Ki─6₇と関連性はなく，対照群と OLP群間のみで有意差があり，基底細胞の形質の変化と考えられる．また対照群と OLP群では Ki–6₇と DSG1陽性率に差はなく，上皮性異形成症といえる明らかな所見はなかった．なお，OLP群の肥厚部で DSG1が有意に高値であった結果は，棘細胞症に伴う基底細胞の形質変化と考えられる．以上のように，実験に用いた試料は，研究対象として適切と考えられる．　OLP群では IVLの細胞膜移行像とともにTGM1が下層部の細胞質から広く発現していた．表皮と同様に，OLPでも基底細胞の細胞質内TGM1が IVLの膜移行を促して，IVLの表皮型の細胞内局在を示していると考えられる．興味深いことに，TGM3は本来細胞質に局在するが，OLPでは細胞膜に発現していた．このような報告はこれまでなく，TGM3の異常な膜発現も IVLの膜移行に関与する可能性がある．OLPではTGM1と TGM3は相補的な関係で分布していた．この関係は表皮の TGM1と TGM3の分布に類似している．また，OLPの上皮肥厚部で DSG1とTGM3の発現に強い相関があり，肥厚部の角化亢進に TGM3が関与する可能性がある．IVLの膜移行は周辺帯形成に必須である．正常粘膜と異なり，TGM1と TGM3の表皮型の上皮内発現が，IVLの細胞膜移行に関与すると考えられる．以上のように，TGM1や TGM3の異所性の局在が，OLPの角化亢進に重要な役割を担っている可能性が示された．

口腔扁平苔癬の異常角化に関与する周辺帯形成関連タンパク質の異所性局在

松本歯科大学博士（歯学）2015甲第182号application/pdf【緒言】口腔扁平苔癬（Oral lichen planus; OLP）はTリンパ球による上皮結合組織境界部（境界部）の傷害性病変である。病理組織学的には帯状リンパ球浸潤と基底層の液状変性に加え、しばしば角化亢進がみられる。しかし、角化異常に関する研究は乏しく、その発生機序は未だ不明である。角化には、周辺帯（Cornified cell envelope; CE）関連タンパク質が重要な役割を担っている。そこで我々は、OLPの角化異常の機序を明らかにするため、CE関連タンパク質の局在を免疫組織学的に検索し、上皮の傷害性変化や増殖性変化との関連を統計学的に解析した。【実験材料及び方法】両側頬粘膜の網状白斑型OLPの20例を実験材料とし、病理学的に著変のない頬粘膜5例を対照群とした。対照群の上皮厚径を基準に、OLP群の上皮を菲薄部と肥厚部に分類した。上皮の各層の厚径を計測し、基底層の細胞傷害の程度をG0からG3に分類して検討した。境界部の変化を確認するためにCollagen IV （COL4）、Keratin 19 （K19）、Desmoglein 1 （DSG1）、Ki-67に対する一次抗体を用い、角化異常の検討のためにCE関連タンパク質であるInvolucrin（IVL）、Transglutaminase 1（TGM1）、Transglutaminase 3（TGM3）に対する一次抗体を用いて免疫染色を行った。COL4、K19、DSG1、Ki-67は陽性率（陽性細胞数/一定領域の総細胞数）を、CE関連タンパク質は陰性率（下層部の陰性細胞層の厚径/上皮全層の厚径）を算出して解析した。【結果】OLP群の上皮では菲薄部と肥厚部が混在し、肥厚部より菲薄部で傷害の程度が有意に高かった。K19とCOL4陽性率は、対照群に比べOLP群で有意に低下したが、肥厚部と菲薄部の差はなかった。一方、DSG1陽性率は、対照群とOLP群間に有意差はないが、OLP群の肥厚部のDSG1陽性率は菲薄部よりも有意に高かった。Ki-67陽性率は対照群とOLP群間、肥厚部と菲薄部間でも有意差はなかった。IVLは対照群の有棘層下部から細胞質に陽性だが、OLP群では最下層から細胞膜に陽性であった。TGM1は対照群とOLP群の有棘層中央部から細胞膜に陽性だが、OLP群では下層部の細胞質にも陽性を示し、陰性率は対照群よりOLP群で有意に低かった。TGM3は対照群の有棘層下部から核と細胞質に陽性で、OLP群では有棘層中央部から細胞膜にも陽性を示した。陰性率は、対照群よりOLP群で高い傾向だった。TGM1とTGM3の陰性率は弱い負の相関関係を示し、OLP群の肥厚部のDSG1陽性率とTGM3陰性率の間で強い負の相関がみられた。【考察】OLP群ではK19とCOL4発現が減少し、境界部で傷害性変化が生じていることを確認できた。K19の減少は、上皮厚径、COL4およびKi-67と関連性はなく、対照群とOLP群間のみで有意差があり、基底細胞の形質の変化と考えられる。また対照群とOLP群ではKi-67とDSG1陽性率に差はなく、上皮性異形成症といえる明らかな所見はなかった。なお、OLP群の肥厚部でDSG1が有意に高値であった結果は、棘細胞症に伴う基底細胞の形質変化と考えられる。以上のように、実験に用いた試料は、研究対象として適切と考えられる。OLP群ではIVLの細胞膜移行像とともにTGM1が下層部の細胞質から広く発現していた。表皮と同様に、OLPでも基底細胞の細胞質内TGM1がIVLの膜移行を促して、IVLの表皮型の細胞内局在を示していると考えられる。興味深いことに、TGM3は本来細胞質に局在するが、OLPでは細胞膜に発現していた。このような報告はこれまでなく、TGM3の異常な膜発現もIVLの膜移行に関与する可能性がある。OLPではTGM1とTGM3は相補的な関係で分布していた。この関係は表皮のTGM1とTGM3の分布に類似している。また、OLPの上皮肥厚部でDSG1とTGM3の発現に強い相関があり、肥厚部の角化亢進にTGM3が関与する可能性がある。IVLの膜移行は周辺帯形成に必須である。正常粘膜と異なり、TGM1とTGM3の表皮型の上皮内発現が、IVLの細胞膜移行に関与すると考えられる。以上のように、TGM1やTGM3の異所性の局在が、OLPの角化亢進に重要な役割を担っている可能性が示された。thesi

Shimada, Katsumitsu

学位論文   口腔扁平苔癬の異常角化に関与する周辺帯形成  関連タンパク質の異所性局在     嶋田  勝光   大学院歯学独立研究科  硬組織疾患制御再建学講座  （主指導教員：長谷川  博雅  教授）    松本歯科大学大学院歯学独立研究科博士（歯学）学位申請論文   Aberrant localization of cornified cell envelop proteins related to abnormal keratinization in oral lichen planus  Katsumitsu Shimada   Department  o f  Hard Tissue Research,  Graduate  School  o f  Oral  Medic ine  (Chief  Academic  Advisor  :  Professor  Hiromasa Hasegawa)    The thes is  submitted  to  the  Graduate  School  o f  Oral  Medic ine ,  Matsumoto  Dental  Univers i ty,  for  the  degree  Ph.D.  in  Dent is try    1  口腔扁平苔癬の異常角化に関与する周辺帯形成  関連タンパク質の異所性局在  論文要旨  【緒言】口腔扁平苔癬（ Oral  l i chen planus ;  OLP）は T リンパ球による上皮結合組織境界部（境界部）の傷害性病変である。病理組織学 的には帯状リンパ球浸潤と基底層の液状変性に加え、 しばしば角化亢進がみられる。しかし、角化異常に関する研究は乏しく、その発生機序は未だ不明である。角化 には、周辺帯（ Corni f ied  ce l l  enve lope ;  CE）関連タンパク質が重要な役割を担っている 。そこで我々は、OLP の角化異常の機 序 を 明ら か に す るため、 CE 関連タンパク 質の局在を免疫組織学的に検索し、上皮の傷害性変化や増殖 性変化との関連を統計学的に解析した。  【実験材料及び方法】両側頬粘膜の網状白斑型 OLP の 20 例を実験材料とし、病理学的に著変のない頬粘膜 5 例を対照群とした。対照群の上皮厚径を基準に、OLP 群の上皮を菲薄部と肥厚部 に分類した。上皮の各層の厚径を計測し、基底層の細胞傷害の程度を G0 から G3 に分類 し て 検 討 し た 。 境 界 部 の 変 化 を 確 認 す る た め に Col lagen IV （ COL4）、Kerat in 19 （ K19）、Desmogle in 1  （ DSG1）、Ki-67 に対する一次抗体を用い 、角化異常の検討のために CE 関連タンパク質であ る Involucr in （ IVL ）、 Transglutaminase  1 （ TGM1 ）、Transglutaminase  3（ TGM3）に対する一次抗体を用いて免疫染色を行った。 COL4、 K19、 DSG1、 Ki-67 は陽性率（陽性細胞数 /一定領域の総細胞数 ） を 、 CE 関連タンパク質は陰性率（ 下層部の陰性細胞層の厚径 /上皮全層の厚径）を算出して解析した。  【結果】OLP 群の上皮では菲薄部と肥厚部が混在し 、肥厚部より菲薄部で傷害の程度が 有意に高かった。K19 と COL4 陽性率は、対照群に比べ OLP 群で有意に低下したが、肥厚部と菲薄部の差はなかった。一方、 DSG1 陽性率は、対照群と OLP 群間に有意差はないが、 OLP 群の肥厚部の DSG1 陽性率は菲薄部よりも有意に高かった。 Ki-67 陽性率は対照群と OLP 群間、肥厚部と菲 薄部間でも有意差はなかった。  2   IVL は対照群の 有棘層下部から細胞質に陽性だが、OLP 群では 最下層から細胞膜に陽 性であった。TGM1 は対照群と OLP 群の有棘層中央部から細胞膜に陽性だが、OLP 群では下層部の細胞質にも陽性を示し、陰性率は対照群より OLP 群で有意に低かった。TGM3 は対照群の有棘層下部から核と細胞質に陽性で、OLP 群では有棘層中央部 から細胞膜にも陽性を示した。陰性率は、対照群より OLP 群で高い傾向だった。TGM1 と TGM3 の陰性率は弱い負の相関関係を示し 、 OLP 群の肥厚部の DSG1 陽性率と TGM3 陰性率の間で強い負の相関がみられた 。  【考察】 OLP 群では K19 と COL4 発現が減少し、境界部で傷害性変化が生じていること を確 認できた 。 K19 の減少は、上皮厚径、 COL4および Ki-67 と関連性はなく、対照群と OLP 群間のみで有意差があり、基底細胞の 形質の変化と考えられ る。また対照群と OLP 群ではKi-67 と DSG1 陽性率に差はなく、上皮性異形成症といえる明らかな所見はなかった。なお、OLP 群の肥厚部で DSG1 が有意に高値であった結果は、棘細胞症に伴う基底細胞 の形質変化と考えられ る。以上のように、実験に用いた試料は、 研究対象として適切と考えられる。  OLP 群では IVL の細胞膜移行像とともに TGM1 が下層部の細胞質から広く発現していた。表皮と同様に、OLP でも 基底細胞の細胞質内TGM1 が IVL の膜移行を促して 、IVL の表皮型の細胞内局在を示していると考えられる。 興味深いことに、 TGM3 は本来細胞質に局在 するが、OLP では細胞膜に発現していた。このような報告はこれまで なく、TGM3 の異常な膜 発現も IVL の膜移行に関与 する可能性がある。OLPでは TGM1 と TGM3 は相補的な関係で分布していた。この関係は表皮の TGM1 と TGM3 の分布に類似している。 また、 OLP の上皮肥厚部で DSG1 と TGM3 の発現に強い相関があり、肥厚部の角化亢進にTGM3 が関与する 可能性が ある。 IVL の膜移行は周辺帯形成に必須である。正常粘膜と異なり、 TGM1 と TGM3 の表皮型の 上皮内発現が、IVL の細胞膜移行に関与すると考えられ る。以上のように、 TGM1 やTGM3 の異所性の局在が、OLP の角化亢進に重要な役割を担っている可能性が示された。  

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Aberrant localization of cornified cell envelop proteins related to abnormal keratinization in oral lichen planus

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