〈Original Papers〉卵細胞内精子注入法(ICSI)により作製した2細胞期胚の冷蔵輸送の検討

Abstract

[Abstract] Previously, we have succeeded in transporting vitrified/warmed 2-cell mouse embryos while maintaining developmental ability at refrigerated temperatures for 50 hours. In this study, we examined the developmental ability of 2-cell stage embryos produced by Intracytoplasmic Sperm Injection (ICSI), which were then refrigerated and transported. Sampling tubes containing 2-cell stage embryos produced by ICSI were placed into embryo transport containers and transported from the Institute of Advanced Technology, Kinki University, Wakayama to the Center for Animal Resources and Development (CARD), Kumamoto University, Kumamoto. The time required for transport was around 2 days. During transport, the temperature of the tubes was kept between 2.5 and 5.0℃. At CARD, the embryos were recovered from the sampling tubes and transferred into the oviducts of pseudopregnant females on the day that a vaginal plug was found (Day 1 of pseudopregnancy). The rate of viable 2-cell stage embryos after transport was 100％ (122/122), of which 21％ developed to live young. [和文抄録] 超低温下(-196℃)における初期胚の凍結輸送に変わる手段として、より簡便な冷蔵下(4℃)における輸送方法について、高度な生殖補助技術を必要とする卵細胞内精子注入法(ICSI)により作成された初期胚を用いて検討した。C57BL/6Jを用いた卵細胞内精子注入法(ICSI)後の卵子は52％(205/392)が生存した。それらの受精率は73％(150/205)であり、その後の2細胞期胚への発生率は83％(124/150)であった。得られた2細胞期胚は少量のM2培地と共にテストチューブへ移し、冷蔵輸送は、クール宅急便にて近畿大学先端技術総合研究所(和歌山)から熊本大学・CARD(熊本)へ輸送した。輸送後の回収された生存胚は100％(122/122)であった。さらに偽妊娠を誘起したICR系マウスの卵管内に移植し発生能を検討したところ21％(26/122)が産子へ発生した。以上の結果より、ICSI由来胚の冷蔵輸送が可能であることを明らかにした