This study vised to detect possible changes in chemical and cellular composition of cow’s milk at different milking sessions and to test if proportional or composite milk sampling can be used instead of separate milk analysis. Two experiments were conducted: one in cows milked thrice daily and the other one in cows milked twice daily. In both experiments, three milk samples were collected from each cow in each milking session in order to determine milk composition at each milking; to have a composite sample, i.e., a single sample from the same aliquots of milk from each milking session; and to have a proportional sample, i.e., a single sample from each milking session in a volume proportional to milk volume yielded. Fat content and fat to protein ratio were higher in the afternoon on both experiments. Protein content was larger in the afternoon on cows milked twice daily, but not on cows milked thrice daily. Lactose level was not different across the milking sessions in any of the experiments. The urea level was higher in the afternoon and evening milking on cows milked thrice daily, and in the morning milking on cows milked twice daily. Somatic cell count did not differ between milking in any experiment. No difference in milk composition was noted between proportional and composite samples on cows milked thrice or twice daily. The collection of proportional and composite samples is recommended in twice or thrice daily milking sessions so that the analysis of milk components becomes more easy and cheap.Este estudo visou detectar possíveis mudanças na composição química e celular do leite de vaca em diferentes sessões de ordenha, e testar se a amostragem de leite proporcional ou composta pode ser usada em vez de uma análise separada do leite. Dois experimentos foram conduzidos: um em vacas ordenhadas três vezes ao dia e outro em vacas ordenhadas duas vezes ao dia. Em ambos os experimentos, três amostras de leite foram coletadas de cada vaca em cada ordenha: para determinar a composição do leite em cada ordenha; ter uma amostra composta, isto é, uma única amostra das mesmas alíquotas de leite de cada sessão de ordenha; e ter uma amostra proporcional, ou seja, uma única amostra de cada sessão de ordenha em um volume proporcional ao volume de leite produzido. O conteúdo de gordura e a relação gordura: proteína foram maiores no período da tarde nos dois experimentos. O conteúdo de proteína foi maior à tarde nas vacas ordenhadas duas vezes ao dia, mas não nas vacas ordenhadas três vezes ao dia. O nível de lactose não foi diferente nas sessões de ordenha em nenhum dos experimentos. O nível de ureia foi maior à tarde e à noite, nas vacas ordenhadas três vezes ao dia e, pela manhã, nas vacas ordenhadas duas vezes ao dia. A contagem de células somáticas não diferiu entre as ordenhas em nenhum experimento. Não houve diferença na composição do leite entre as amostras proporcionais e compostas em vacas ordenhadas três vezes ao dia. Recomenda-se a coleta de amostras proporcionais e compostas em duas ou três sessões diárias de ordenha, para que a análise dos componentes do leite se torne mais fácil e barata
