A fibrose cística (FC) é uma doença genética autossômica recessiva de alta incidência em populações euro-descendentes (1: 2500 nascimentos) causada por mutações no gene CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator). Aproximadamente 2.000 mutações foram descritas, sendo a mais prevalente F508del. Estas mutações causam disfunções na proteína CFTR que regula as passagens de cloro e de sódio através da membrana celular, conduzindo a diferentes graus de manifestações clínicas. Atualmente, no Rio Grande do Sul (RS), apenas o estudo molecular para a mutação F508del é realizada. Portanto, é necessário a busca por métodos moleculares que possibilitem a detecção de outras mutações. O objetivo principal desse estudo foi implementar uma metodologia molecular para a detecção de 11 mutações (R1162X, G85E, R117H, 2789 + 5G> A, G542X, R334W, W1282X, R553X, 1717-1G>A, 3120-1G>A e G551D) no gene CFTR, utilizando a extensão de base única (SNaPshot), e aplicá-la em uma população com suspeita de FC (teste do suor alterado ou limítrofe ou com a mutação F508del detectada). O material genético foi extraído a partir de sangue total de 34 pacientes com suspeita de FC através da técnica de salting-out. As frequências alélicas das mutações encontradas por SNaPshot foram: G542X (5,9%), R334W (1,5%), W1282X (2,9%), 3120-1G>A (2,9%). Os genótipos encontrados, levando em consideração o complemento de informações de F508del foram: 9 (26,5%) F508del/desconhecido, 2 (5,9%) G542X / F508del, 1 (2,9%) 3120-1G>A / F508del, 1 (2,9%) R334W / F508del, 1 (2,9%) G542X / G542X, 1 (2,9%) 3120-1G>A /desconhecido, 1 (2,9%) W1282X/F508del e 1 (2,9%) W1282X/desconhecido. Adicionalmente, foi realizada a detecção da mutação F508del em pacientes com suspeita de FC que vieram a óbito durante a triagem, além da padronização de uma técnica para extração de DNA a partir de sangue seco em papel filtro S&S 903. Noventa e três pacientes com IRT maior do que 70 ng/mL foram estudados. A frequência de 2,15% destes pacientes apresentou a mutação F508del em heterozigose. Através do estudo desenvolvido foi possível padronizar um método de detecção molecular de 11 mutações no gene CFTR que, uma vez implantado na rotina do Serviço de Referência de Triagem Neonatal, permitirá um melhor direcionamento do tratamento, aconselhamento genético, prognóstico e qualidade de vida dos pacientes.Cystic fibrosis (CF) is an autosomal recessive genetic disease of high incidence in euro-descendant populations (1: 2500 live births) and is caused by mutations in the CFTR gene (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator). Approximately 2,000 mutations have been identified, F508del being the most prevalent. These mutations cause dysfunctions in the CFTR protein that regulates the passages of chloride and sodium across cell membranes, leading to different degrees of clinical manifestations. Currently, in the state of Rio Grande do Sul (RS), only the molecular study for the F508del mutation is performed. Therefore, it becomes necessary to search for molecular methods that allow the detection of other mutations. The main objective of this study was to implement a molecular methodology for the detection of 11 mutations (R1162X, G85E, R117H, 2789 + 5G> A, G542X, R334W, W1282X, R553X, 1717-1G> A, 3120-1G> A and G551D) in CFTR gene, using the Single-Nucleotide Primer Extension (SNaPshot), and apply the methodology in a population with CF suspicion (altered or borderline sweat test or with F508del mutation detected). The genetic material was extracted from whole blood of 34 patients with CF suspicion by salting-out technique. The allele frequencies of mutations found by SNaPshot assay were: G542X (5.9%), R334W (1.5%), W1282X (2.9%), 3120-1G>A (2.9%). The genotypes found, complementary to the information of F508del, were: 9 (26,5%) F508del/unknown, 2 (5.9%) G542X / F508del, 1 (2.9%) 3120-1G>A / F508del, 1 (2.9%) R334W / F508del, 1 (2.9%) G542X / G542X, 1 (2.9%) 3120-1G>A / unknown, 1 (2.9%) W1282X/F508del and 1 (2.9%) W1282X/ unknown. Additionally, was performed the detection of F508del mutation in patients with CF suspicion that came to death during the screening process, besides of the standardization of a technique for the extraction of DNA from dry blood fixed on filter paper S&S 903. Ninety-three patients with IRT greater than 70 ng / mL have been studied. The frequency of 2,15% of these patients presented F508del mutation in heterozygosis. Through the developed study it was possible to standardize a molecular detection method for 11 mutations in the CFTR gene that, once implanted in the routine of Newborn Screening Service Reference, will allow xvii better targeting of the treatment, genetic counseling, prognosis and quality of patients life
