Valeriana glechomifolia Meyer, planta nativa do sul do Brasil produz valepotriatos, os quais são relacionados com propriedades sedativas, ansiolíticas, fungicidas e antitumorais. Este trabalho tem por objetivo a avaliação in vitro da atividade antiproliferativa de extratos padronizados, de plantas micropropagadas e de cultura de raízes de Valeriana glechomifolia em linhagens tumorais humanas U138-MG (glioblastoma), HT-29 (adenocarcinoma colorretal) e OVCAR (carcinoma ovariano). Nos experimentos foram analisados extratos bruto e semi-purificado de plantas micropropagadas e de culturas de raízes a fim de quantificar os valepotriatos presentes nas amostras e, devido a limites de detecção, apenas os extratos bruto e clorofórmico semi-purificado de plantas micropropagadas foram utilizados para avaliação antiproliferativa. Os extratos apresentaram efeito antiproliferativo em todas as linhagens tumorais, U138-MG, HT-29 e OVCAR, e doses utilizadas, 23,125 μg/mL, 46,25 μg/mL, 92,5 μg/mL, 185 μg/mL, 370 μg/mL e 1850 μg/mL. No extrato bruto a maior redução na viabilidade celular foi observada na linhagem U138-MG na dose 46,25 μg/mL. Já no extrato clorofórmico semi-purificado a maior redução da viabilidade celular foi observada na linhagem U138-MG na dose 92,5 μg/mL, havendo ainda resultados semelhantes em outras linhagens e dosagens. As avaliações mostram que as diferentes linhagens apresentaram perfis semelhantes na redução da viabilidade celular após tratamento com os extratos de Valeriana glechomifolia