Paiva, Rodrigo Minuto

Paris, Fernanda de

Silva, Jéssica Lacerda

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Lume 5.8

35ª SEMANA CIENTÍFICA DO HOSPITAL DE CLÍNICAS DE PORTO  43 Clin Biomed Res 2015; 35 (Supl.)   P 4088 Determinação do limite mínimo de detecção da técnica de nested-PCR in house para vírus Epstein-Barr Jéssica Lacerda Silva, Fernanda de Paris, Rodrigo Minuto Paiva Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA)  Introdução: O vírus Epstein-Barr (EBV) é o agente etiológico da mononucleose e de certas síndromes linfoproliferativas. O diagnóstico laboratorial do EBV assume grande importância quando associado a enfermidades em pacientes imunossuprimidos, tais  como  HIV  positivos  e  transplantados. O  uso  da  reação  em  cadeia da polimerase (PCR) em amostras de sangue e líquor permite a detecção do DNA viral com alta sensibilidade e especificidade. O objetivo deste estudo foi verificar a sensibilidade analítica da técnica de PCR como um dos parâmetros de padronização e validação de ensaios in house (padronizados pelo próprio laboratório). Métodos: Foram preparadas quatro diluições seriadas (10, 25, 50 e 100 cópias/µL) de DNA viral do EBV a partir de uma concentração conhecida (1,7 X104 cópias/µL) de controle comercial quantificado (Vircell®, Granada, Espanha). As diluições foram submetidas a 20 ensaios de nested-PCR, de acordo com protocolo do Laboratório de Biologia Molecular. Resultados: As diluições de 10, 25, 50 e 100 cópias/µL foram encontradas em 50, 95, 100 e 100% das replicatas dos ensaios, respectivamente. Discussão: o limite mínimo de detecção ou sensibilidade analítica de um ensaio laboratorial é a concentração mais baixa do analito em uma amostra que pode ser consistentemente detectada, ou seja, que apresenta reprodutibilidade. Neste estudo, o limite mínimo de detecção da técnica de PCR para EBV foi 25 cópias/µL, sendo encontrado este valor em 95% das replicatas. Considerando dados da literatura e, por se tratar de um ensaio de PCR do tipo nested, o limite de detecção deste estudo indica que o ensaio apresenta uma boa sensibilidade, comparado a valores encontrados em outros estudos utilizando técnicas de biologia molecular. Palavras-chaves: PCR, limite mínimo de detecção, vírus Epstein-Barr. μl de lipofectamina. Conclusões: Entre os dois métodos testados, a lipofectamina mostrou ser a mais eficiente para a transfecção de hMSC, quando utilizados parâmetros específicos. O protocolo otimizado apresentou resultados satisfatórios e, em  

Determinação do limite mínimo de detecção da técnica de nested-PCR in house para vírus Epstein-Barr

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Determinação do limite mínimo de detecção da técnica de nested-PCR in house para vírus Epstein-Barr

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