Paiva, Rodrigo Minuto

Paoli, Juliana de

Paris, Fernanda de

Lume 5.8

34ª SEMANA CIENTÍFICA DO HOSPITAL DE CLÍNICAS DE PORTO ALEGRE 23       Clin Biomed Res 2014; 34 (Supl.)      451 VALIDAÇÃO DO ENSAIO DE PCR EM TEMPO REAL PARA DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS EM AMOSTRAS CLÍNICAS Fernanda de Paris, Rodrigo Minuto Paiva, Juliana de Paoli. Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA)  Introdução: um dos exames laboratoriais que contribuem para o diagnóstico clínico da tuberculose é a pesquisa do DNA do complexo Mycobacterium tuberculosis. Esta pesquisa pode ser realizada por diferentes técnicas moleculares, porém a mais utilizada é a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Atualmente o Hospital de Clínicas está implantando a técnica de PCR em Tempo Real por trazer resultados mais rápidos, garantindo melhor triagem de pacientes para tratamento e diminuindo a disseminação da tuberculose. Objetivo: validação da técnica de PCR em Tempo Real para pesquisa do complexo M. tuberculosis, comparando com a técnica de Nested-PCR (PCR convencional). Métodos: foram selecionados através dos resultados no ensaio de Nested-PCR 38 espécimes clínicos (11 amostras respiratórias positivas, 07 não-respiratórias positivas, 10 respiratórias negativas e 10 não-respiratórias negativas). Estas amostras foram testadas para a técnica em implantação (PCR em Tempo Real). Foi utilizado o índice de kappa calculado através do software Winpepi 11.25 para avaliar a reprodutibilidade dos resultados nos dois ensaios, considerando os resultados positivo e negativo. Resultados: considerando um total de 18 amostras positivas no Nested-PCR, 17 apresentaram o mesmo resultado (01 amostra foi negativa) por PCR em Tempo Real. Todas as 20 amostras negativas  testadas no PCR  convencional  apresentaram o  mesmo resultado no PCR em  Tempo Real. Foi calculado o  índice de kappa para todos os resultados encontrados (kappa=0,95; IC 95% [0,84 a 1,00]). Conclusões: considerando as 20 amostras com resultado negativo, houve concordância de 100% entre os dois ensaios. Em relação às amostras positivas, das 18 amostras testadas, 17 apresentaram o mesmo resultado nos dois testes e uma única amostra não reproduziu, mesmo repetindo-se os ensaios. O valor de 0,95 de kappa expressa uma concordância quase perfeita no que diz respeito à reprodutibilidade dos dois ensaios, validando a PCR em Tempo Real para utilização no laboratório como ferramenta diagnóstica de M. tuberculosis. Palavra-chave: PCR em Tempo Real; diagnóstico laboratorial; Mycobacterium tuberculosis. 

Validação do ensaio de PCR em tempo real para diagnóstico laboratorial de mycobacterium tuberculosis em amsotras clínicas

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