Costa, Ana Carolina Oliveira da

Pinto, Paulo Marcos

Schrank, Augusto

Schrank, Irene Silveira

Portuguese

Lume 5.8

Ciências Biológicas   390Sessão 11 Genética Molecular III  CARACTERIZAÇÃO DO GENE SRG DE METARHIZIUM ANISOPLIAE. Ana Carolina Oliveira da Costa, Irene Schrank, Augusto Schrank, Paulo Marcos Pinto, Marilene Henning Vainstain (orient.) (Centro de Biotecnologia do RS, Laboratório de Fungos de Importância Médica e Biot, UFRGS). Estudando a relação entre o estresse oxidativo e a patogenicidade de Metarhizium anisopliae ao carrapato Boophilus microplus, nosso grupo isolou, uma ORF que foi chamada de srg (gene relacionado ao superoxido). O objetivo deste trabalho é analisar a possível relação entre o gene srg e o sistema de proteção contra espécies reativas de oxigênio (EROs) de M. anisopliae. Primers foram projetados, com base na seqüência cDNA previamente isolada, para caracterizar de sete linhagens de M. anisopliae. Todas as linhagens testas obtiveram um único amplicon de 450pb e mostraram o mesmo padrão de restrição com a enzima HindIII. Análise por “Northern Blotting” mostrou que a presença de Paraquat (um conhecido indutor de radicias superóxido) induz a transcrição do gene, sugerindo que o produto do gene srg está envolvido no sistema de proteção EROs do fungo. Com o objetivo de obter-se mais informações sobre a proteína codificada pelo gene srg, a ORF deste gene foi clonada no vetor de expressão pET23d. A proteína recombinante, expressa em E. coli, mostrou o tamanho esperado de cerca de 17kDa, ficou presente, predominantemente, em corpos de inclusão e foi solubilizada de forma significativa quando se adicionou 0, 5% de SDS. A proteína solúvel foi usada para a produção de anticorpos policlonais em coelhos da raça Nova Zelândia. Após quatro semanas os soros dos coelhos imunizados reconheceram a proteína de 17kDa presente nos extratos expressando a proteína SRG heteróloga. (CNPq-Proj. Integrado). 094 

Caracterização do gene SRG de Metarhizium anisopliae

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