Costa, Ana Paula Metz

Fonseca, Luciane Schons

Machado, Claudio Xavier

Pinto, Paulo Marcos

Schuck, Desirée Cigaran

Zaha, Arnaldo

Lume 5.8

Ciências Biológicas   410Sessão 29 Genética Molecular B  CLONAGEM E EXPRESSÃO DA METIONINA-AMINOPEPTIDASE DE MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE EM ESCHERICHIA COLI. Ana Paula Metz Costa, Paulo Marcos Pinto, Desirée Schuck, Cláudio Xavier Machado, Luciane Schons Fonseca, Arnaldo Zaha, Henrique Bunselmeyer Ferreira (orient.) (UFRGS). Responsável pelas maiores perdas econômicas da suinocultura mundial, a pneumonia enzoótica (PE) é causada pela bactéria Mycoplasma hyopneumoniae e se caracteriza por tosse seca, crescimento lento e baixa mortalidade, apesar de altas taxas de morbidade e do aumento da susceptibilidade a infecções secundárias. O seqüênciamento completo dos genomas das cepas J (não-patogênica) e 7448 (patogênica) de M. hyopneumoniae, feito pela Rede Sul de Análise de Genomas e Biologia Estrutural, e a análise proteômica em andamento, forneceram dados para a identificação de genes classificados como possíveis fatores de virulência da bactéria. Dentre estes genes, está o da metionina-aminopeptidase (MAP), protease que catalisa a remoção da metionina inicial de proteínas recém-sintetizadas. Esta modificação pós-traducional é fundamental para os processos celulares e a identificação de inibidores específicos da MAP de M. hyopneumoniae pode representar uma alternativa terapêutica. O objetivo desse trabalho é a clonagem e expressão da MAP de M. hyopneumoniae, para sua posterior caracterização estrutural e funcional. Para esse fim, a seqüência codificadora completa da MAP foi amplificada com primers específicos a partir de clones de uma biblioteca genômica e o produto de amplificação foi clonado no vetor pGEX-4T3, com a clonagem e a orientação do inserto sendo confirmadas por seqüenciamento. A MAP recombinante foi expressada em E. coli BL21 Codon Plus RP na forma de fusão com glutationa-S-transferase (GST) e, purificada por cromatografia de afinidade em coluna de glutationa-Sepharose 4B. Após a remoção da porção correspondente à GST, a MAP recombinante foi inicialmente utilizada para a imunização de camundongos visando à produção de anti-soro específico. Este anti-soro será inicialmente utilizado para verificar a expressão da MAP por M. hyopneumoniae em cultura e em situações de infecção. (CNPq).  266 

Clonagem e expressão da metionina-aminopeptidase de Mycoplasma hyopneumoniae em Escherichia coli

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Lume 5.8