Braga, Luisa Maria Gomes de Macedo

Camassola, Melissa

Dalberto, Tiago Pires

Delgado-Cañedo, Andrés

Nardi, Nance Beyer

Oliveira, Marianne Schrader de

Lume 5.8

 Ciências Biológicas  359  TRANSFERÊNCIA GÊNICA UTILIZANDO UM VETOR NÃO VIRAL PARA MUCOPOLISSACARIDOSE TIPOI. Marianne Schrader de Oliveira, Melissa Camassola, Tiago Pires Dalberto, Andres Delgado Cañedo, Luisa Maria Gomes de Macedo Braga, Nance Beyer Nardi, Kátia Kvitko (orient.) (Departamento de Genética, Imunogenética, UFRGS). A Mucopolissacaridose Tipo I (MPS I) é uma doença hereditária autossômica recessiva, causada pela deficiência de enzimas lisossomais envolvidas na degradação de glicosaminoglicanos (GAGs). A deficiência da enzima (-L-iduronidase (IDUA) caracteriza a Síndrome de Hurler que leva ao acúmulo de dermatan e heparan sulfato nos lisossomos acarretando em um fenótipo degenerativo progressivo com o comprometimento de vários órgãos como cérebro, coração, ossos, fígado, córneas e pulmões que leva ao óbito antes dos dez anos de idade. Uma alternativa promissora para a MPS I é a terapia gênica. Ensaios pré-clínicos estão sendo desenvolvidos testando diferentes vetores. O presente trabalho visa a construção de um vetor não viral (plasmídeo) com o gene da IDUA funcional. O fragmento que contém o cDNA do gene IDUA utilizado possui 2, 17 kb e foi isolado do plasmídeo pH2.1 através da clivagem com as endonucleases de restrição BamHI e HindIII. Este fragmento foi clonado no vetor de expressão pREP9 que apresenta expressão estável e menor risco de resposta imunológica por possuir elementos do Epstein-Barr vírus (EBV), resultando no plasmídeo pRIDUA. A transformação para a obtenção de um grande número de cópias do pRIDUA foi realizada em linhagem XL1 de Escherichia coli. A reação da PCR foi realizada diretamente das colônias resultantes para confirmar a transformação. Atualmente, estamos realizando a transferência do pRIDUA em culturas primárias de estroma hematopoietico de camundongos nocaute para o gene IDUA da linhagem C57Bl/6. A próxima etapa será testar diferentes vias de administração do vetor nestes camundongos. (FAPERGS/IC).  014 

Transferência gênica utilizando um vetor não viral para Mucopolissacaridose Tipo I

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