Sorrentino, Julia Medeiros

Lume 5.8

Financiamento: CNPq, CAPES, PROPESq/UFRGS , FIPE/HCPA, IBN-NETPerfil de expressão de microRNA em pacientes com autismo clássico: um estudo caso-controleJulia M. Sorrentino1,3, Tamara Vaccaro1,2,3, Cláudia M.B. Andrade4 , Sócrates Salvador3,5, Rudimar dos Santos Riesgo3,5, Rogério Margis2,4, Carmem Gottfried1,2,31Grupo de Pesquisa em Plasticidade Neuroglial, Departamento de Bioquímica – UFRGS;2Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas - Bioquímica, ICBS – UFRGS;3Programa para Transtornos Invasivos do Desenvolvimento (ProTID/HCPA);4Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular – Centro de Biotecnologia – UFRGS;5Programa de Pós-Graduação em Saúde da Criança e do Adolescente, Faculdade de Medicina – UFRGSIntroduçãoO autismo clássico, juntamente com os outros transtornos doespectro, é um dos distúrbios mais comuns do desenvolvimento infantil.Apesar da grande variabilidade no quadro clínico, os transtornos doespectro autista comprometem o desenvolvimento humano através detrês manifestações principais: alterações qualitativas na interação social,nas habilidades de comunicação e presença de comportamentos einteresses estereotipados e repetitivos. Apesar de diversas evidências dealterações neurológicas, genéticas e imunológicas, não existe ainda ummarcador biológico definido. Entretanto, alterações epigenéticaspossivelmente estão envolvidas e possibilitam, por exemplo, detectarpadrões diferenciais de expressão de microRNA. Os microRNA sãoseqüências de aproximadamente 22 nucleotídeos de RNA (ácidoribonucléico) não-codificante que regulam a expressão de outros genesprovavelmente através do emparelhamento base-específico com RNAmensageiro (mRNA) alvo, conforme mostra a figura 1. Padrõesdiferenciais de expressão de microRNA tem sido correlacionados com umgrande número de patologias de natureza multifatorial, portanto aidentificação da patologia em nível molecular pode ser utilizada comobase para o desenvolvimento de exames diagnósticos e tratamentos maisespecíficos.ObjetivoEste estudo tem como objetivo avaliar o padrão de expressão de26 microRNA de células leucocitárias de pacientes com autismo clássico.MetodologiaEstudo caso-controle: comparação da expressão de 26 microRNAde 8 pacientes com autismo clássico do gênero masculino com idadeentre 5 e 10 anos frente ao perfil de expressão de 8 indivíduos típicos.Após punção periférica e obtenção da amostra, o sangue comanticoagulante foi misturado com o reagente Trizol e as amostrasestocadas em freezer -80°C para posterior extração de RNA total. Asíntese de cDNA foi realizada com a utilização de primer multiplex comoligonucleotídeos miRLoop específicos para o conjunto de 26 microRNA.As análises da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em tempo realforam realizadas através do sistema SYBR Green®, utilizando umoligonucleotídeo que é microRNA específico e um oligonucleotídeocomplementar a seqüência universal presente no oligonucleotídeoutilizado para a síntese dos cDNA.As reações foram feitas no equipamento StepOnePlus™ Real-Time PCR System da Applied Biosystems e analisadas pelo StepOne™Software v2.0; a análise estatística aplicada foi o Teste T independentecom p<0,05.Fiqura1:  Processamento de microRNA. ( http://www.micrornaworld.comacesso em 11/10/2010).Resultados e DiscussãoA Figura 2 apresenta a curva de amplificação representativa daanálise e a curva de Melting dos 26 microRNA de uma amostra.Após a análise das 16 amostras (8 pacientes autistas e oitocontroles) foi aplicado o software GeNorm®, que revelou 4 microRNAnormalizadores da reação. Esses normalizadores têm expressãouniforme entre as amostras e são usados como “genes de referência”.Portanto, dos 26 microRNA analisados, a expressão de 22 foi calculadaa partir dos 4 normalizadores.Com a análise estatística, verificou-se que 6 microRNA têmexpressão aumentada nos pacientes autistas em relação ao grupocontrole, com p<0,05, conforme mostra a tabela 1:Esses resultados são relevantes e promissores na busca demarcadores biológicos para o auxílio do diagnóstico precoce deautismo. Novos estudos serão necessários para ampliar o númeroamostral e avaliar novas moléculas de microRNA e respectivos alvos demRNA.miR_A 0,006miR_B 0,001miR_C 0,042miR_D 0,024miR_E 0,010miR_F 0,007Tabela 1: Os nomes reais dos microRNA foram alterados para letras (A-F), pelo fato de que os resultados ainda não foram publicados. Valor de p indica diferença do grupo controle.Relevância da análise de microRNAA expressão de microRNA pode ser uma estratégia promissorapara o desenvolvimento de exames diagnósticos e tratamentos maisespecíficos para o autismo.Padrão de microRNA alterado em relação ao grupo controleValor pCnt x AutConclusãoFigura 2(A): Exemplo de Curva deAmplificaçãoFigura 2(B): Exemplo de Curva de Melting(dissociação específica do produto deamplificação)

Perfil de expressão de microRNA em pacientes com autismo clássico: um estudo caso-controle.

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Lume 5.8