Masuda, Aoi

Panatieri, Raquel Hoffmann

Rieger, Elenara

Lume 5.8

 Ciências Biológicas  409 SUB-CLONAGEM DA BMCL1 EM PCDNA3. Raquel Hoffmann Panatieri, Elenara Rieger, Aoi Masuda, Itabajara da Silva Vaz Junior (orient.) (UFRGS).  O carrapato Boophilus microplus é um ectoparasita bovino e um dos principais responsáveis por prejuízos econômicos. O controle deste carrapato tem sido feito atualmente com o uso de acaricidas. A BmCl1, uma cisteíno proteinase encontrada em células de intestino, tem como função sugerida a degradação de hemoglobina e vitelina, sugerindo sua importância no desenvolvimento do embrião e no processo digestivo. A sub-clonagem foi realizada em pcDNA3, vetor para expressão em eucariotos, partindo do vetor CL1pBLUESCRIPT, contendo o exon da proteinase. A amplificação do material foi realizada por PCR com primers específicos contendo sítios de clivagem para as enzimas BamH1 e Xho1. A reação de ligação foi realizada numa proporção de 1:3 (vetor:inserto) a 16ºC por 18 horas. O produto da ligação foi submetido a eletroporação e as células competentes foram plaqueadas em meio LB contendo ampicilina (LBA) e incubados em estufa a 37°C por 18 horas. Foi feito um inóculo com as colônias em LBA que permaneceram em uma incubadora de agitação orbital a 37°C por 18 horas. A extração de DNA foi realizada pelo método de lise alcalina. A presença do cDNA da BmCL1 foi testada por clivagem com as enzimas BamH1 e Xho1 e PCR com primers específicos identificando um inserto de 996bp. Para a confirmação da clonagem o plasmídio BmCl1pcDNA3 está sendo seqüenciado. A expressão será testada por transfecção em células COS-1. (Fapergs). 227 

Sub-clonagem da BMCL1 em PCDNA3

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Lume 5.8