Foi realizado um experimento com o objetivo de avaliar a suplementação de 25-hidroxicolecalciferol (25(OH)D3) associado com vitamina D3 em dietas de reprodutoras pesadas. Para tal, foram alojadas 650 matrizes Cobb 500 em delineamento completamente casualizado composto por quatro tratamentos e oito repetições de 20 fêmeas e 2 machos cada. Os tratamentos experimentais foram constituídos de premixes vitamínicos contendo 2000 e 3400 UI/kg ração de vitamina D3 como única fonte ou 2000 UI D3 associado à 35 ou 69 μg/ton de 25(OH)D3. Não houve efeito da suplementação de 25(OH)D3 sobre a produção semanal de ovos totais, ovos incubáveis e ovos danificados, número total/incubável de ovos/ave alojada durante o período experimental compreendido das 32 às 67 semanas de idade. Não houve efeito da suplementação sobre o peso dos ovos. Já a qualidade da casca, mensurada através da gravidade específica, demonstrou melhoria com a suplementação de 25(OH)D3 para os ovos de reprodutoras com 60 semanas de idade, independente da dose. Na semana 35 a suplementação de 3400UI D3 apresentou maior gravidade específica em relação a suplementação de 2000 UI D3 e 2000 UI D3 +69 μg 25(OH)D3. Não foi observada diferença significativa (P>0,05) para a eclosão quando ovos férteis foram incubados nas 54, 64 e 67 semanas de idade das aves. A realização do embriodiagnóstico demonstrou menor mortalidade de embriões na terceira semana para o 2000 UI D3 P(0,05) was observed for hatchability of fertile eggs at 54, 64 and 67 weeks of broiler breeders. The hatch residue breakout showed less mortality of embryos at third week for treatments from 2000 UI D3 P(<0,03) at 64 week and less mortality of embryos at second week of development from hens with 67 week and supplemented with 2000IU D3 and 2000IU D3+ 69 μg 25(OH)D3. The results indicated that the supplementation of 25- hydroxycholecalciferol with cholecalciferol had similar effects as the diets with vitamin D3 as the only source on the productive performance of broiler breeders hens