Hino Akiya

Kitajima Takashi

Matsui Taei

北嶋 隆

家島 大輔

日野 晶也

松井 太衛

榊原 徳昭

日野, 晶也

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Hino, Akiya

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松井, 太衛

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Matsui, Taei

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北嶋, 隆

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Kitajima, Takashi

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榊原, 徳昭

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家島, 大輔

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B-2. 1995年 度総合理 学研 究所 プロジェク ト研 究報告1.ア ー マ 「海産無脊椎動物における体腔細胞の凝集 に関す る基礎研究」2.研 究 メ ンバ ー代 表者共 同研 究者研究協力野井嶋原日松北榊晶也(神 奈川大学理学部 助教授)太衛(藤 田保健衛二生大学 助手)隆(テ ルモ株医科学研究所 主任研究員)徳昭、家島大輔(卒 業研究生)3.研 究期 間 平 成7年4月1日 ～ 平成8年3月31日4.研 究の背景 お よび結果 の概 要海産無脊椎動物 の体腔 液や体腔細 胞 には血 球凝 集活性 を示す ものが多 く、高等動物 の免疫系 と基本 的には同様 の シス テムがあ り、生体防御機構 と してはた らい ている と考 え られて いる。 これ らの動物 を材料 に、細胞 の凝集作用機構 を明 らか にす るこ とに よって、動物細胞 にみ られる基本 的な認識機構が解 明で きる可能性 があ る。棘 皮動物 や原索動物 な どの体腔液 には細胞凝 集活性 のあるいわ ゆる レクチ ンが存在す るが 、その作 用機構 まで は明 らか になってい ない。最近 、echinoidinと 名付 け られたム ラサ キ ウニの体腔 レクチ ンに、RGD(Arg.-Glu-Asp)配 列が存在 し、培養細胞 に対 して この配列 依存性 の細胞 接着作 用が あ る こと、 また この作用 がechinoidinの認識糖 で あ るasialofetuin-glycopeptideに よって阻害 を受 けない とい う興 味深 い現象が 明 らか にな った。 さ らに 、マ ナマ コの体腔 細胞 か らCタ イプの レクチ ンが精 製され 、体 腔 細胞 の 凝集がRGD配 列 を持つ ペ プチ ドで 阻害 され るこ とが 明 らか にな った(松 井 ら1994)。 そ こで本研 究 では、 ムラサ キ ウニ を材料 に、 そ の体腔液 を用いinvitro系 で細胞 の凝 集 を観 察 で きる実験系 を確 立 し、echinoidinの 生理 的作 用 を明 らか に して細胞 の認識機構 を解 明す る手がか りを得 よ うと試み た。初 期 の段 階 で は、48穴 プ レー トに各種 試 薬 を混合 させ た 人工 海水 をあ らか じめ25ul注 入 してお き、 そ こにウニ を解剖 して得 られた体腔液 を各225ulず つ分注 し撹拝 しなが ら培養 し固定後観察 した。 この方法 で は、実験 開始 直後 か ら溶液 の粘 度が上 昇す る液性 の反応 も含 め て細胞 の凝集 がす ばや く起 こ り50mMEDTAの み に凝集を阻害す る効 果 を確 認 で きた に とどまった。体腔 液 中で細胞 が 自発的 な凝 集がお こらな い実 験 系 が 必 要 と な った 。 この た め に、 ウ ニ を解 剖 せ ず に 、 あ らか じめ10mMEDTAや 他 の試 薬 を入 れ た注射器 を用 い て体腔細胞 を抜 き取 る方 法 に切 り換えた。 この方法で体腔細胞 の凝集 を阻害す る糖 を検 討 した ところ、他 の無脊椎 動物で知 られてい たGlcUA,GlcNA,GalMAc等 で はな く、 ガ ラク ツロン酸が特 異的 に阻害をお こ し、かつ これ を取 り除 くと細胞 が凝 集 を開始す るこ とが明 らか になった。上 記 の方 法 に よ り、細 胞 凝集 を人為 的 に制御 しなが ら実験 す る ことが可能 になり、 この系 を用 いてRGD配 列 を持 つペ プチ ドの効果 の検討 を進 めてい る。一121一

B-2. 海産無脊椎動物における体腔細胞の凝集に関する基礎研究

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B-2. 海産無脊椎動物における体腔細胞の凝集に関する基礎研究

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