Estudio del efecto inhibitorio de algunos compuestos en la actividad reductasa de la ferredoxin NADP+ reductasa del patógeno Leptospira interrogans

Abstract

Este trabajo está dentro de una línea de investigación centrada en la búsqueda de compuestos que presenten acción bactericida contra el microorganismo patógeno Leptospira interrogans, el cual causa la enfermedad denominada Leptospirosis, una zoonosis muy extendida a nivel mundial. Leptospira es una bacteria Gram negativa que presenta en su metabolismo una enzima, la Ferredoxina NADP(H) reductasa (LepFNR) que se está estudiando como diana farmacológica en otros organismos patógenos (la FPR del fitopatógeno Xanthomonas). Sus diferencias tanto estructurales como funcionales con las análogas presentes en organismos eucariotas hacen que esta proteína sea un buen candidato para actuar sobre ella y que no afecte al hospedador. La enfermedad de Weill (Leptospirosis en humanos) presenta cuadros desde leves hasta graves, y en estos últimos casos el fallo renal puede causar la muerte, por lo que encontrar un tratamiento o una vacuna sería una forma de parar la extensión de dicha enfermedad. En esta memoria se estudia el poder de inhibición de la actividad de la LepFNR de 7 compuestos (LP1-LP7) identificados mediante un cribado masivo de una quimioteca formada por 1120 compuestos. Además, se ha estudiado otro compuesto más, el D5, que es un buen candidato como inhibidor de la enzima análoga en Xanthomonas. El objetivo era comprobar si este mismo compuesto podía ser prometedor en otro tipo de microorganismo con características diferentes en una proteína con función similar. Este trabajo ha consistido en la medida del IC50 de estos compuestos mediante la actividad diaforasa de la LepFNR y el estudio del tipo de inhibición que ejercen tres de ellos sobre dicha actividad (LP1, LP2 y D5). Con los datos obtenidos se han realizado ajustes globales a las funciones de Michaelis-Menten y Lineweaver-Burk (inversa), ambas modificadas por el factor de inhibición, lo cual permite determinar el tipo de inhibición. Se ha concluido que, si bien todos los compuestos estudiados inhiben la actividad de la LepFNR como mínimo hasta un 80 %, los valores de IC50 que presentan son demasiado altos para ser buenos inhibidores (>50 µM). De los estudios de inhibición realizados con los tres compuestos se deduce que LP1 (con el menor IC50 de los compuestos LPs) actúa como inhibidor competitivo mientras que LP2 (que inhibe al 100% la actividad) y D5 llevan a cabo su acción inhibitoria mediante un tipo de inhibición no competitivo. A partir de la estructura de LP1 y LP2 se pueden diseñar compuestos de segunda generación que mejoren la inhibición de la actividad de la LepFNR y así avanzar en el descubrimiento de fármacos para tratar la Leptospirosis