"Wszystkie organizmy są w sposób ciągły i nieunikniony narażone na kontakt z szeregiem
egzogennych hydrofobowych związków ksenobiotycznych. Substancje te
mają zdolność do przenikania lipidowych błon komórkowych i akumulacji w tkance
tłuszczowej [1]. Zanieczyszczenia przemysłowe są źródłem powstawania związków
o właściwościach mutagennych, cytotoksycznych, teratogennych i kancerogennych.
Związki o podobnych właściwościach znajdujące się również w roślinach, nazywane
są często ksenobiotykami. Do najczęściej badanych związków należą m.in.:
dioksyny, aminy aromatyczne, benzopireny, benzoantarceny, polichlorowane bifenyle
i nitrozaminy."(...

Kalemba-Drożdż, Małgorzata

Państwo i Społeczeństwo Medycyna i zdrowie publiczne

Polish

Repozytorium Instytucjonalne Krakowskiej Akademii

Państwo i SpołeczeństwoVII: 2007 nr 4M ałgorzata Kalemba-Drożdż1, M aria Kapiszewska1DESTABILIZACJA GENETYCZNA WYWOŁANA SKUMULOWANYM DZIAŁANIEM ZANIECZYSZCZEŃ ŚRODOWISKOWYCH I ESTROGENÓW2Wszystkie organizmy są w sposób ciągły i nieunikniony narażone na kontakt z sze­regiem egzogennych hydrofobowych związków ksenobiotycznych. Substancje te mają zdolność do przenikania lipidowych błon komórkowych i akumulacji w tkance tłuszczowej [1]. Zanieczyszczenia przemysłowe są źródłem powstawania związkówo właściwościach mutagennych, cytotoksycznych, teratogennych i kancerogennych. Związki o podobnych właściwościach znajdujące się również w roślinach, nazy­wane są często ksenobiotykami. Do najczęściej badanych związków należą m.in.: dioksyny, aminy aromatyczne, benzopireny, benzoantarceny, polichlorowane bife- nyle i nitrozaminy. Natomiast do najbardziej rakotwórczych i mutagennych Zanie­czyszczeń zalicza się wielopierścieniowe węglowodory aromatyczne (PAH, z ang.: Policyclic Aromatic Hydrocarbons), wytwarzane głównie przy spalaniu węgla, ale także pochodne chlorku winylu [1]. Zwłaszcza te ostatnie są badane szczególnie intensywnie, gdyż wiele z nich ma działanie estrogenowe, a tym samym mogą wpły­wać na funkcję reprodukcyjne. Do organizmu zwierząt czy człowieka dostają się one przez układ oddechowy drogą kropelkową oraz przez układ pokarmowy wraz z zanieczyszczoną wodą lub żywnością [1-8]. Eliminacja lipofilnych ksenobiotyków jest uzależniona od ich metabolicznej transformacji przede wszystkim w wątrobie.Ksenobiotyki ingerujące w steroidogenezę, podobnie jak skumulowana ilość estrogenów w całym okresie życia kobiety, mogą powodować destabilizację gene­tyczną, która zwiększa ryzyko chorób nowotworowych, takich jak rak piersi i na­rządów rozrodczych. Na całkowity czas życiowej ekspozycji wpływa m.in. wczesne rozpoczęcie miesiączkowania, krótki okres laktacji oraz późne wejście w menopau-1 Krakowska Szkoła Wyższa im. Andrzeja Frycza Modrzewskiego.2 Stosowane skróty: AhR -  receptor ary Iowy ch węglowodorów, ER -  receptor estrogenowy, ERE -  sekwen­cja rozpoznawana przez ER, PAH -  policykliczne węglowodory aromatyczne, XRE -  sekwencja rozpoznawana przez AhR, DNA-kwas deoksyrybonukleinowy.zę. Zakłada się, iż kancerogenne właściwości 17P-estradiolu wynikają z ich zdolno­ści do stymulacji proliferacji komórek lub/i z genotoksycznych właściwości meta­bolitów pośrednich estrogenu, głównie estrogenów katecholowych oraz generacji reaktywnych form tlenu. Ponadto estrogeny wykazują właściwości cytotoksyczne, teratogenne i kancerogenne.Intensywna ekspozycja na ksenobiotyki w połączeniu z wysokim stężeniem estrogenów w organizmie prowadzi do współzawodnictwa o metabolizujące je en­zymy, działające we wspólnych metabolicznych szlakach detoksyfikujących oby­dwa rodzaje związków. Niedobory tych enzymów wynikające zarówno z nadmiaru substratów, jak i niskiej aktywności enzymów mogą z kolei prowadzić do nasilenia produkcji wolnorodnikowych form metabolitów pośrednich oraz reaktywnych form tlenu. To one bezpośrednio uszkadzają materiał genetyczny komórki poprzez two­rzenie adduktów DNA i/lub pęknięć nici DNA. Takie uszkodzenia w komórkach proliferujących mogą zainicjować proces kancerogenezy.Wspólne szlaki kataboliczne ksenobiotyków i estrogenówProces inaktywacji hydrofobowych ksenobiotyków oraz estrogenów przebiega dwu­etapowo. Pierwszym etapem (Faza I) usuwania ksenobiotyków jest ich hydroksyla- cja, czyli proces polegający na dołączeniu do nich grupy OH pochodzącej z rozkładu wody, po to, aby uczynić je związkami polarnymi, czyli rozpuszczalnymi w wodzie, które łatwo mogą być wydalone z organizmu. Procesom tym nie podlegają jednak ksenobiotyki dobrze rozpuszczalne w tłuszczach, a także polarne i kwaśne; Proce­sy hydroksylacji wymagają energii, co oznacza, że ich przebieg katalizują enzy­my. Enzymy I fazy detoksyfikacji należą do monooksygenaz z grupy cytochromów P450, kodowanych przez rodzinę genów polimorficznych GYP. Poszczególne for­my genu CYP pojawiły się w odpowiedzi na rozmaitość w środowisku ksenobio­tyków i związków chemicznych obecnych w łańcuchu pokarmowym. Oznaczane są numerami definiującymi cztery rodziny genów, litery oznaczają podrodziny. Na przykład CYP1A1, enzym kodowany przez silnie konserwowany ewolucyjnie gen metabolizujący związki z grupy PAH, takich jak: dioksyny, aminy aromatyczne, po- lichlorobifenyle i nitrozaminy, ale także metabolizujący estrogeny enzym CYP1A2, metabolizujący aflatoksyny, lub CYP2E1, metabolizujący etanol i chlorek winylu. Także CYP 1B 1 j  est głównym enzymem odpowiedzialnym w równym stopniu za hy- droksylację 17P-estradiolu, jak i związków heterocyklicznych, zanieczyszczających środowisko, takich jak np.: PAH, aminy arylowe, TCDD (tetrachlorodibenzenodiok- syny). OYP1B1 ulega konstytutywnej ekspresji, czyli niewymagąjącej "działania czynników zewnętrznych. Ekspresja genu kodującego ten enzym jest także dodatko­wo indukowana przez wspomniane heterocykliczne substraty za pomocą receptora arylowęglowodorowego AhR (Aryl Hydrocarbon Receptor). Oznacza to możliwość addytywnego działania obydwu związków, a tym samym znaczne zwiększenie po­ziomu uszkodzeń DNA w zanieczyszczonym środowisku rip. w okresie owulacji czy ciąży, gdy stężenie estrogenu jest wysokie.142 MAŁGORZATA KALEMBA-DROŻDŻ, MARIA KAPISZEWSKADESTABILIZACJA GENETYCZNA WYWOŁANA SKUMULOWANYM DZIAŁANIEM... 143Zmiany polimorficzne, których efektem będzie wzrost aktywności enzymu, czyli np. mutacje w pojedynczym nukleotydzie, w tych genach, wydają się zwięk­szać ryzyko zachorowania na nowotwory hormonozależne. Pokazano np. związek pomiędzy obecnością polimorficznych form genu CYP1A1 a wzrostem ryzyka zapadnięcia na nowotwory piersi kobiet mających ten alternatywny allel. Jednak dopiero obecność w organizmie kobiet polichlorowanych bifenyli (PCB), pocho­dzących z zanieczyszczonego środowiska, ujawnia tę zależność. Przypuszczalnie indukowanie wzrostu ekspresji CYP1A1 przez te środowiskowe zanieczyszczenia podnosi hydroksylację w tkance piersiowej. Te hydrofitowe związki mają silne po­winowactwo do DNA, powodując ich uszkodzenia i przyczyniając się do wzrostu ryzyka kancerogenezy. .Innymi związkami, pod których wpływem rośnie aktywność CYP1A2, en­zymu odpowiedzialnego za 2-hydroksylację 17p-estradiolu i estronu, są: nikotyna, omeprazol, fenobarbitał oraz rifampicyriy [17]. Tak więc także palenie papierosów czy zażywanie pewnych leków wpływa na ryzyko riowotworzenia.Inaktywacja hydroksylowych pochodnychSzybkie i wydajne usunięcie z organizmu hydroksylowych metabolitów Fazy I, czy­li zarówno estradiolu, jak i heterocyklicznych ksenobiotyków, wymaga, aby weszły one w reakcje koniugacji ze związkami drobnocząsteczkowymi, takimi jak np.gluta- tion w tzw. Fazie II. Wszystkie reakcje koniugacji katalizują enzymy FazyII. Koniu­gacje z glutationem katalizują transferazy glutationowe (GST). Inną drogą usuwania hydrofitowych związków jest przyłączenie grupy sulfonowej. Procesy acetylacji ka­talizuj ąN-acetylotransferazy, które inaktywują reaktywne pochodne aromatycznych amin heterocyklicznych. Natomiast transferazy glukuronowe koniugująhydroksylo- wane związki aromatyczne z kwasem głukuronowym.Do najbardziej interesujących szlaków metabolicznych usuwania metabo­litów Fazy I należy koniugacja z grupami metylowymi. Reakcję tę katalizuje O- -metyltransferaza katecholowa (COMT), kodowana przez polimorficzny gen. Gen zawierający polimorfizm w obrębie 3. eksonu, w którym nastąpiła zmiana adeniny na guaninę w kodonie 108 (w formie cytoplazmatycznej, a 158 w formie zasocjo- wanej z błoną) powoduje trzy lub czterokrotne zmniejszenie aktywności enzyma­tycznej COMT w porównaniu z aktywnością enzymu kodowanego przez allel dziki, czyli niezmutowany.Głównymi substratami dla COMT są związki aromatyczne, zawierające ugru­powanie katecholowe. Oznacza to, że o aktywność tego enzymu współzawodniczą estrogeny, katecholaminy i flawonoidy. Te ostatnie związki, występujące w pokar­mach roślinnych, herbacie i winie, mogą ograniczyć metylacje katecholowych es­trogenów, narażając komórki na ich genotoksyczne działania, zwiększając ryzyko nowotworów hormonozależnych.Jedynie równowaga pomiędzy procesami I i II Fazy detoksyfikacji, czyli hy- droksylacji i koniugacji, chroni komórki zarówno przed uszkodzeniami wywołany­mi metabolitami pośrednimi powstającymi w metabolizmie estrogenów, jak i wy­wołanymi ksenobiotykami. Brak zachowania tej równowagi może w konsekwencji prowadzić do utraty stabilności genetycznej komórek.Działanie karcynogenneGenotoksyczność hydroksylowanych metabolitówAktywowane metabolicznie związki aromatyczne mogą tworzyć addukty z zasada­mi azotowymi w DNA. Addukty DNA są stabilne lub podlegająprocesom usuwania zasad, głównie zasad purynowych, czyli apurynacji. To, jakim procesom podlegają uszkodzone zasady azotowe, zależy od miejsca ataku węglowodorów aromatycz­nych na zasadę azotową. Silniejszy potencjał mutagenny mają addukty depurynują- ce, w których wyniku pozostaje w nici DNA puste miejsce apurynowe, które zwięk­sza ryzyko błędnej naprawy lub nieprawidłowej syntezy materiału genetycznego. Utrwalenie takich błędów grozi utratą kontroli nad podziałami komórkowymi, pro­wadząc do transformacji nowotworowej.Także obecność aktywowanych związków heterocyklicznych może prowadzić do nasilenia się stanu stresu oksydacyjnego. W trakcie cyklicznych reakcji utlenia­nia i redukcji hydroksylowych pochodnych związków aromatycznych z udziałem tlenu cząsteczkowego jest generowany anionorodnik ponadtlenkowy. Może być on redukowany enzymatycznie lub nieenzymatycznie do nadtlenku wodoru i dalej do innych reaktywnych form tlenu (RFT). Produkty pośrednie tych przemian mają wy­starczający potencjał, aby modyfikować zasady azotowe, wprowadzać pojedyncze pęknięcia do nici i inne oksydacyjne uszkodzenia DNA. Oksydacyjnie zmodyfiko­wane zasady azotowe mogą działać także mutagennie lub blokować proces replika­cji DNA. Ma to miejsce zwłaszcza wtedy, gdy komórkowe układy antyoksydacyjne, takie jak dysmutazy ponadtlenkowe, katalaza, peroksydazy glutationowe, ulegają wyczerpaniu z związku z nadmiarem powstających elektrofilowych substratów.Aktywne pochodne ksenobiotyków nie tylko uszkadzają DNA, lecz także mogą wiązać się kowalencyjnie do białek lub też je modyfikować oksydacyjnie, co sprzyja powstaniu krzyżowych wiązań z kwasem deoksyrybonukleinowym i zabu­rza jego strukturę, prowadząc do zahamowania replikacji. Jeżeli zostaną uszkodzo­ne białka odpowiedzialne za replikację i naprawę DNA, to przebieg tych procesów zostanie zakłócony. Hydroksylowane aromatyczne węglowodory mogą również re­agować z lipidami np. w błonach komórkowych, co skutkuje wzmożoną peroksyda- cją kwasów tłuszczowych. Wreszcie RFT generowane przez metabolity PAH mogą modulować sygnalizację wewnątrzkomórkową, prowadząc do poważnych zaburzeń w regulacji ekspresji genów. Wszystkie te procesy mogą skutkować mutageńezą.Obecność w środowisku licznych policyklicznych związków aromatycznych zwiększa ryzyko zachorowania na nowotwory szczególnie u osób, których systemy ochronne są upośledzone, które np.: mają polimorficzne geny kodujące mniej ak­tywne formy enzymów II Fazy detoksyfikacji lub bardziej aktywne formy enzymów I Fazy.144 MAŁGORZATA KALEMBA-DROŻDŻ, MARIA KAPISZEWSKADESTABILIZACJA GENETYCZNA WYWOŁANA SKUMULOWANYM DZIAŁANIEM... 145 Działanie poprzez receptory wewnątrzkomórkowePodobieństwo strukturalne PAH do naturalnych substancji steroidowych sprawia, że ich działanie może naśladować działanie hormonów. Obecność estrogenów może spowodować różnorodną odpowiedź organizmu. Pod ich wpływem dochodzi do proliferacji i różnicowania docelowych komórek, posiadających receptory estroge­nowe (ER). Oddziaływanie hormonów steroidowych odbywa się poprzez receptory wewnątrzkomórkowe obecne w cytoplazmie i jądrze docelowych komórek. Kom­pleks receptora związanego z cząsteczkami estrogenu pełni rolę j ądrowego czynnika transkrypcyjnego, który wiąże się do regulatorowych sekwencji EREs (Estrogen Re- sponse Elements) w rejonie promotorowym docelowych genów. W wyniku tego pro­cesu materiał genetyczny staje się dostępny dla aktywnego kompleksu polimerazy RNA, co uruchamia proces transkrypcji. Hormony sterydowe poprzez odpowiednie receptory zmieniają całe profile ekspresji genów w komórkach, a nie tylko aktyw­ność pojedynczych genów. Jednocześnie następuje indukcja lub supresja od ok. 50 do 100 różnych genów.Istnieją także specyficzne receptory wewnątrzkomórkowe rozpoznające wę­glowodory aromatyczne AhR, które oddziałuj ą  poprzez XRE (Xenobiotic Response Element) w obrębie promotorów na ekspresję genów związanych np. z kataboli­zmem związków heterocyklicznych, analogicznie do szlaków sygnalizacji estroge­nów. Nie poznano jeszcze dokładnie wszystkich mechanizmów komórkowych, na które mogą wpływać heterocykliczne związki aromatyczne poprzez receptorowe szlaki sygnalizacyjne. Receptory wewnątrzkomórkowe po związaniu liganda sta­nowią silne stymulatory transkrypcji genów, w tym również tych zaangażowanych w proliferację komórek. Jednoniciowe DNA, występujące podczas replikacji, jest bardziej podatne na uszkodzenia niż nieaktywne DNA o strukturze zamkniętej -  dwuniciowej. Nagromadzenie się mutacji w obrębie genów lub rejonów regulato­rowych odpowiedzialnych np. za proliferację, naprawę DNA czy apoptozę może prowadzić do transformacji nowotworowej komórek.Szlaki sygnalizacyjne estrogenów i PAH przeplatają się. PAH mają zdolność oddziaływania nie tylko z receptorami arylowymi AhR, lecz także z receptorami es­trogenowymi ER. Stwierdzono, że niektóre aromatyczne związki heterocykliczne mają zdolność wiązania się do receptorów estrogenowych, powodując m.in. nie­kontrolowaną stymulację wzrostu komórek. Różne PAH wykazują działanie pro- estrogenowe lub do niego antagonistyczne w zależności od swojej struktury, która determinuje siłę i sposób wiązania do receptorów.Ekspozycja organizmu na ksenobiotyki środowiskowe może prowadzić do za­początkowania i przyspieszenia procesu nowotworowego. Efektywność ich działa­nia uwarunkowana jest wydajnością detoksyfikacyjnych procesów metabolicznych (Faza I i Faza II) zależnych od aktywności enzymów, kodowanych przez polimor- ficzne geny oraz obecnością estrogenów. Obydwa rodzaje związków współzawodni­czą bowiem o te same enzymy, oddziałują również na komórki poprzez receptorowe szlaki komunikacji wewnątrzkomórkowej. Równoczesne działanie mutagennych ksenobiotyków i stymulacja podziałów komórkowych przez estrogeny prowadzą do zwiększenia ryzyka zajścia karcynogenezy. Ponadto ekspozycja organizmu naaromatyczne węglowodory pochodzące z zanieczyszczenia środowiska prowadzi do utraty równowagi oksydacyjno-redukcyjnej komórki szczególnie przy wysokim stę­żeniu estrogenów, także zwiększając ryzyko transformacji komórek.Bibliografia ? :D. Liska, M. Lyon, D.S. Jones, Detoxification and biotransformational imbalances, t. 2, New York 2006, s. 122-140.J.E. Bohonowych, M-S. Denison, Persistent binding o f ligands to the aryl hydrocarbon re­ceptor, „Toxicol Sci” Vol. 98,2007, nr l, s. 99-109.A.B. Okey, An ary1 hydrocarbon receptor odyssey to the shoresoftoxicology: the Deichmann Lecture, International Congress o f Toxicology-XI, „Toxicol Sci” Vol. 98, 2007, nr 1,■ - s. 5-38. : • : .M. Moretti [et al.], Primary DNA damage and genetic polymorphisms for CYP1A1, EPHX and GSTM1 in workers at a graphite electrode manufacturing plant, „BMC Public Health” Vol. 7, 2007, nr 1, s. 270.O. Genbacev [et al.], Disruption of oxygen-regulatedresponses underliespathological chan- ges in the placentas ofwomen who smoke or who arepassively exposed to smoke du- ringpregnancy, „Reproductive Toxicology” Vol. 17, 2003, nr 5, s. 509-518.F.P. Perera [et al.], Biomarkers in maternal and newbom blood indicate heightened fetal susceptibility to procarcinogenic DNA damage, „Environmental Health Perspectives” Vol. 112, 2004, nr 10, s. 1133-1136.S. Pavanello [et al.], HPLC/fluorescence determinatión of anti-BPDE-DNA adducts in mono- nuclear whiteblood cells from PAH-exposed humans, „Carcinogenesis” Vol. 20,1999, nr 3, s. 431-435. . ;T. Van de Wiele [et al.], Human colon microbiota transform polycyclic aromatic hydrocar- bons to estrogenie metąbolite, „Enyironmental Health Perspectives” Vol. 113, 2005, nr 1, s. 6-10. ,146 MAŁGORZATA KALEMBA-DROŻDŻ, MARIA KAPISZEWSKA ......

Destabilizacja genetyczna wywołana skumulowanym działaniem zanieczyszczeń środowiskowych i estrogenów

https://repozytorium.ka.edu.pl/bitstream/11315/25354/1/KALEMBA_Destabilizacja_genetyczna_wywolana_skumulowanym_dzialaniem_2007.pdf

Destabilizacja genetyczna wywołana skumulowanym działaniem zanieczyszczeń środowiskowych i estrogenów

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Repozytorium Instytucjonalne Krakowskiej Akademii