应用随机寡核苷酸文库修饰磁性颗粒提高血浆蛋白质的鉴定覆盖度

Abstract

基于随机寡核苷酸与蛋白质之间的离子、亲和、疏水、氢键等相互作用力及多种空间结构作用,发展了一种基于随机寡核苷酸文库作为配基的新型血浆样品处理方法.采用寡核苷酸文库修饰的磁性颗粒（ MNP@ssDNA）材 料,在生理缓冲体系条件下捕获血浆样品中的蛋白质.比较了两种洗脱体系的洗脱效果,并利用nano-RPLC-ESI-MS/MS对获得的蛋白质酶解液组分进行分析.结果表明, MNP@ssDNA材料处理后的血浆蛋白质鉴定数量提升了约29. 5%,两种洗脱体系呈现良好的互补性（26.7%）.血浆中前10种高丰度蛋白质的谱图占有率从处理前的31.82%降低到21. 31% （洗脱体系1）和26.20%（洗脱体系2）.在鉴定到的蛋白质中,丰度最低的蛋白质在血浆中 的质量浓度约为0. 29ng/mL,该蛋白质仅在MNP@ssDNA材料处理后被鉴定到.结果证明MNP@ssDNA策略不仅能有效降低血浆中高丰度蛋白质的丰度,也为低丰度蛋白质的深度挖掘提供了新的思路