甲烷氧化菌Methylomonas sp．GYJ3中甲烷单加氧酶基因与16S rRNA序列分析

Abstract

甲烷氧化细菌中的关键酶系甲烷单加氧酶是一个含双核铁的多组份氧化酶，常温、常压下能够催化甲烷转化为甲醇。对甲烷氧化细菌Methylomonas sp．GYJ3中溶解性甲烷单加氧酶基因和16S rDNA进行了测序与分析。利用已知相关基因数据库信息，设计了PCR引物和测序引物，获得了满意的测序结果。全长的溶解性甲烷单加氧酶基因为5690bp，部分16S rDNA的序列长度为1280bp。与已发表的甲烷氧化细菌中甲烷单加氧酶进行了比较，结果表明MMOX组份中氨基酸序列的同一性为78％到99％，基因序列的同一性为71％到97％，6个组份中orfY片段的同一性相对较低。MMOX氨基酸序列的多序列联配表明，MMOX序列具有高度保守性，特别是在双核铁中心区域。16S rDNA进化分析显示Methylomonas sp．GYJ3与γ蛋白细菌是相关联的，基于MMOX氨基酸序列的进化分析证明，与Methylomonas sp．GYJ3最近似的菌株是Ⅰ型甲烷氧化细菌Methylomonas sp．KSWⅢ。综合分析表明，菌株GYJ3属于Ⅰ型甲烷氧化细菌Methylomonas sp．属。这个结果为Ⅰ型甲烷氧化细菌也能表达溶解性甲烷单加氧酶提供了新的证据。羟基化酶的理论等电点是6．28，理论分子量为248874．41Da