珠蛋白水解产物的二维液相色谱分析

Abstract

本文以强阳离子交换色谱(SCX)作第一维，反相色谱(RP)作第二维，以一个10通阀直接连接两支色谱柱，构建正交的SCX／RP二维液相色谱系统，并以珠蛋白水解产物的分析对其加以评价。样品首先由第一维阳离子交换色谱(Hyperil SCX，100mm×4．6mmI．D．)在pH4．0的磷酸盐缓冲体系中以0．5mL／min的低流速洗脱分离，洗脱产物通过10通阀直接富集在反相分析柱(Hypersil BDS C18，250mm×4．6mmI．D．)顶端，切换10通阀后进一步进行反相分析。阳离子交换色谱采用不连续的逐步增加盐浓度的19步台阶梯度方式洗脱，切割转移样品组份后再进行第二维分析。二维液相色谱系统的分辨率、峰容量都得到提高，出峰数量达到690多个，系统峰容量达到5643。二维液相色谱系统均采用常规尺寸的色谱柱，可以处理大进样量的样品，对生物样品的制备纯化有一定的指导意义