El objetivo del presente proyecto de tesis doctoral es investigar las moléculas del HLA-G y HLA-E desde el punto de vista inmunogenético en las detenciones espontáneas del embarazo en el primer trimestre de la gestación, puesto que ambos antígenos de histocompatibilidad, según la literatura, tienen un papel fundamental en el establecimiento de la tolerancia materno-fetal y en el mantenimiento del embarazo. Realizan funciones tan importantes como la inmunosupresión de células inmunes maternas para que el feto sea capaz de escapar del ataque del sistema inmunológico materno.
Para la determinación de este objetivo utilizamos muestras de cariotipo embrionario normal, donde se desconoce la causa que llevó a la pérdida de la gestación y utilizamos como grupo de referencia las detenciones espontáneas del embarazo donde se obtiene un cariotipo embrionario anormal, suponiendo que en estos casos la causa del aborto es la anomalía cromosómica. Utilizamos también una novedosa técnica de recogida de muestras como es la histeroembrioscopia, donde la obtención del tejido se realiza de una forma pura y con la mínima contaminación materna posible, dando una mayor fiabilidad al cariotipo fetal.
Por un lado quisimos determinar la distribución de determinados polimorfismos del HLA-G en nuestra población de estudio, así como la presencia o ausencia de un determinado polimorfismo en muestras de trofoblasto embrionario de pacientes con abortos espontáneos de primer trimestre de cariotipo normal y compararla con los polimorfismos de las pacientes con embarazos de cariotipo anormal. Además, puesto que se cree que es poco probable que un único polimorfismo sea capaz de producir la pérdida de la gestación, realizamos la agrupación de los diferentes polimorfismos encontrados en haplotipos con el objetivo de evaluar la distribución en nuestra población de estudio y compararla con nuestro grupo de referencia. No encontramos diferencias significativas entre los dos grupos de comparación en los distintos aspectos analizados.
También, quisimos evaluar el patrón e intensidad de expresión de los antígenos de histocompatibilidad HLA-G y HLA-E en distintos tejidos como trofoblasto embrionario, líquido amniótico y sobrenadantes de medios de cultivo de trofoblasto procedentes de gestaciones detenidas de cariotipo normal y los resultados fueron comparados con los de las muestras de cariotipo anormal. No encontramos diferencias significativas entre los dos grupos de comparación en los distintos aspectos analizados.
Por último, quisimos determinar la relación entre los polimorfismos analizados en la región genética del HLA-G, asociados previamente en otros estudios a la alteración de la expresión de HLA-G, así como los haplotipos generados mediante dichos polimorfismos, y la expresión proteica de esta molécula de sistema inmune en la superficie celular del trofoblasto embrionario, para intentar evaluar la influencia que un determinado polimorfismo o un haplotipo puede tener sobre la secreción proteica. No se encontró ninguna asociación entre los polimorfismos del HLA-G y la alteración de su expresión proteica. Así como no se encontró ninguna asociación entre los haplotipos generados conforme a los polimorfismos del HLA-G y la alteración de su expresión proteica.The aim of the present project of doctoral thesis is to investigate the molecules of the HLA-G and HLA-E from the point of view immunogenetic in the spontaneous detentions of the pregnancy in the first trimester of the gestation, since both antigens of histocompatibility, according to the literature, have a fundamental role in the establishment of the mother - foetal tolerance and in the maintenance of the pregnancy. They realize functions as important as the immunosuppression of immune mother cells in order that the fetus is capable of escaping of the assault/attack of the immunological mother system.
For this aim we use samples of karyotype embryonic normally, where there is not known the reason that led to the loss of the gestation and we use as group of reference the spontaneous detentions of the pregnancy where there is obtained an embryonic abnormal karyotype, supposing that in these cases the reason of the abortion is the chromosomal anomaly. We use also a new technology of samples collection since it is the hysteroembrioscopic, where the obtaining of the sample is realized of a pure form and with the minimal possible mother pollution, giving a major reliability to the foetal karyotype.
On the one hand we wanted to determine the distribution of determined polymorphisms of the HLA-G in our population of study, as well as the presence or absence of a certain polymorphism in samples of trophoblast embryonic of patients with spontaneous abortions of the first trimester of normal karyotype and to compare it with the polymorphisms of the patients with pregnancies of abnormal karyotype. In addition, since it is believed that it is slightly probable that an only polymorphism is capable of producing the loss of the gestation, we grouping different polymorphisms in haplotypes with the aim to evaluate the distribution in our population of study and to compare it with our group of reference. We don`t found significant differences between both groups of comparison in the different analyzed aspects.
Also, we wanted to evaluate the presence and intensity of expression of the antigens of histocompatibility HLA-G and HLA-E in different types of samples as trophoblast embryonic, amniotic fluid and supernatant of culture medium of trophoblast proceeding from arrested gestations of normal karyotype and the results were compared with those of the samples of abnormal karyotype. We don`t found significant differences between both groups of comparison in the different analyzed aspects.
Finally, we wanted to determine the relation between the polymorphisms analyzed in the genetic region of the HLA-G, associated before in other studies to the alteration of the expression of HLA-G, as well as the haplotypes generated by means of founded polymorphisms, and the expression of this molecule of immune system in the cellular surface of the embryonic trophoblast. That is to said, we wanted to evaluate the influence that a certain polymorphism or haplotypes can have on the superficial molecular secretion. We didn´t find any association between the polymorphisms of the HLA-G and the alteration of his expression. As well as didn´t find any association between the haplotypes generated according to the polymorphisms of the HLA-G and the alteration of his expression
