Di Indonesia, jerami padi merupakan sebagai hasil samping dari kegiatan pertanian yang dihasilkan dalam jumlah yang cukup besar. Limbah jerami padi berpotensi untuk dijadikan sebagai bahan baku energi alternatif yaitu bioetanol atau bahan bakar alternatif lainnya. Jerami padi memiliki kandungan selulosa dan hemiselulosa yang dapat dimanfaatkan untuk memproduksi glukosa dengan cara hidrolisis secara enzimatis. Proses enzimatis merupakan proses ramah lingkungan berbahan baku terbarukan (renewable raw material). Hidrolisisenzimatis dilakukandengan menggunakanenzimselulase untuk memproduksi glukosa.Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh waktu hidrolisis dan konsentrasi enzim yang digunakan terhadap produksi glukosa dari jerami padi yang telah diberi perlakuan awal secara alkali dan ozonolisis.Pada penelitian ini, berat jerami padi yang digunakan sebanyak 50 gram dilarutkan dalam media 100 ml dan pH diatur menjadi 5. Parameter yang divariasikan adalah waktu hidrolisis 5,10, 15, 20 dan 25 jam, sedangkan konsentrasi enzim yang ditambahkan adalah 10% ,20%, 30% dan 40% b/v dari berat jerami padi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa glukosa terbesar yang diperoleh adalah 0,08752 gr pada waktu hidrolisis 25 jam dan volume stater enzim 40% dari berat jerami padi.Kata kunci : glukosa, hidrolisis, enzimatis, jerami padi
