上田 秀一

下田 和孝

山口 剛

川俣 安史

江原 鮎香

瀬尾 芳輝

English

Dokkyo Medical University Repository / 獨協医科大学リポジトリ

第46回獨協医学会学術集会
幼若期ラットへの反復揺
さぶり刺激は一過性の微
小脳出血および発達後の
不安様行動を起こす
1）精神神経医学
2）解剖学（組織）
3）生理学（生体制御）
川俣安史 1），江原鮎香 2），山口　剛 2），瀬尾芳輝 3）， 
下田和孝 1），上田秀一 2）
【背景】乳幼児揺さぶられ症候群は激しい揺さぶりに
よって惹起される．既存のモデル動物は血腫が巨大で
死亡率も高く，発達後の行動変化を解析できなかった．
【目的】発達期ラットへ揺さぶり刺激を与え，微小脳
出血（microhemorrhages：MHs）を伴う新規モデル動
物を作製し，発達後の行動を解析する．
【方法】SD 系雄ラット生後 3 日（P3）から P14 に揺
さぶり刺激を与えた（S 群）．揺さぶり刺激を与えなか
ったラットを対照群（C 群）とした．Perls 法による鉄
染色，3, 3’-diaminobenzamide（DAB）および rat endo-
thelial cell antigen 1（RECA-1）抗体を用いた単染色お
よび2重免疫組織化学染色を行った．S群ラットにMRI
装置を用いて磁化率強調画像を撮像した．S 群および
C 群 P70 のラットにオープンフィールド試験による行
動解析を行った．
【結果】DAB 染色では S 群に MHs を認め，特に海馬，
前頭前皮質を含む大脳皮質に高頻度で観察された．
RECA-1とDABの2重染色により赤血球の毛細血管か
らの漏出を認めた．磁化率強調画像では，S 群ラット
の P4 に MHs の低信号を認めるが，経時的に低信号は
回復した．この時期以降にも鉄染色では MHs 周囲で
の鉄取り込み細胞を含む染色像が観察された．P35 以
降では出血像は認めず，この出血は一過性であること
が確認された．オープンフィールド試験では，S 群の
水平活動および垂直活動はC群と比較して有意に減少
し，発達後の不安様行動を認めた．
【考察】幼若期ラットへの揺さぶり刺激によって，発
達後に不安様行動が認められた．不安およびストレス
反応に関係する海馬および前頭前皮質に MHs が多く
存在することから，一過性に出現する MHs が発達後
の不安様行動に関係する可能性が示唆された．
【結論】被虐待児の精神症状の解析に本モデル動物が
有用であると考えられた．
マウス卵ヒト精子顕微注入
による活性化試験（MOAT：
Mouse Oocyte Activation Test）
時の受精後オートファジー
への影響について
埼玉医療センター　リプロダクションセンター
吉川直希，山本　篤，杉本公平，岡田　弘
【目的】オートファジーは栄養飢餓などの条件下
で活性化される細胞内のタンパク質分解機構であ
り，細胞の品質管理や病原体の除去など様々な役
割を担っている．また生殖領域においても受精後
3 時間でオートファジーは誘導され，胚の発生に
必須の働きを担っている．一方，男性不妊領域で
MOAT（Mouse Oocyte Activation Test）と呼ばれる
マウス卵にヒト精子を顕微授精させ卵子の活性化
能力（胚発生能力）をみる精子機能検査がある．
受精後に誘導される機構の一つにオートファジー
の活性化があるが，MOAT 時の研究報告はない．
この為，異種精子注入に伴うオートファジー誘導
への影響を見るため研究を行った．
【方法】8-10 週齢マウスを過排卵させ，MII 卵を
回収し，ヒトまたはマウス精子を 1 個または 2 個，
顕微授精させ 5 時間後に 4％ PFA で固定した．オ
ートファゴソーム膜上に局在する microtubule-as-
sociated protein 1 light chain 3 alpha（LC3）の免疫染
色を行い，蛍光顕微鏡下に観察を行った．
【結果】MOAT 時にも LC3 ドットが確認できた．
マウス精子注入の胚と比較して，MOAT 胚におけ
る LC3 ドット数は有意に多かった．またヒト精子
の 1 個および 2 個受精の胚の比較では，LC3 ドッ
ト数に有意差はみられなかったが，2 個受精の胚
における LC3 ドットが大きかった．
【考察】MOAT 時にオートファジーが強く誘導さ
れた原因として，異種由来のタンパク質を排除す
る反応が強く生じた可能性や，ヒト精子中にオー
トファジー誘導因子が多く含有している可能性が
考えられた．一方で，ヒト精子 2 個受精の胚では
LC3 ドットが大きくなり，除去すべき異常たんぱ
く質量に差がある可能性が考えられた．今後はオ
ートファジーの活性に関して定量的に評価するこ
とでさらに検証を行う必要がある．
【結論】MOAT 法において，オートファジー活性
の個人差を評価することが新たな精子機能の発展
につながる可能性がある．
78 獨協医誌
16.15.


幼若期ラットへの反復揺さぶり刺激は一過性の微小脳出血および発達後の不安様行動を起こす

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幼若期ラットへの反復揺さぶり刺激は一過性の微小脳出血および発達後の不安様行動を起こす

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