Grabarczyk, Piotr

Kopacz, Aneta

Kubicka-Russel, Dorota

Liszewski, Grzegorz

Sulkowska, Ewa

Zwolińska, Paulina

Łętowska, Małgorzata

Polish

Via Medica Journals

145www.jtm.viamedica.plARTYKUŁ poglądowYJournal of Transfusion Medicine 2015, tom 8, nr 4, 145–146 Copyright © 2015 Roche diagnostics polska Sp. z o.o.ISSN 1689–6017Adres do korespondencji: mgr Dorota Kubicka-Russel, Zakład Wirusologii, Instytut Hematologii i Transfuzjologii,  ul. I. Gandhi 14, 02–776 Warszawa, e-mail: drussel@ihit.waw.plWyniki badań walidacyjnych testu cobas® MPX oraz cobas® DPX z wykorzystaniem systemu cobas® 6800 i p 680 firmy RocheDane prezentowane podczas seminarium „Postępy w badaniach przeglądowych dawców krwi” (Warszawa, 5–6 października 2015 r.)Results of evaluation cobas® MPX assay and cobas® DPX assay performed on system cobas® 6800 and p 680 (Roche). Data presented at the seminar “Advances in blood donor screening” (Warsaw, 5–6 October 2015)Dorota Kubicka-Russel, Aneta Kopacz, Grzegorz Liszewski, Paulina Zwolińska,  Ewa Sulkowska, Małgorzata Łętowska, Piotr GrabarczykInstytut Hematologii i Transfuzjologii w WarszawieJ. Transf. Med. 2015; 8: 145–146WstępTest cobas® MPX przeznaczony jest do badań przeglądowych u dawców krwi wykonywanych na analizatorze cobas® 6800. Jest to jakościowy test multiplex, wykorzystujący metodę real-time PCR, który wykrywa w osoczu i surowicy RNA: HIV-1 M, HIV-1 O, HIV-2, HCV oraz DNA HBV. Test jedno-cześnie różnicuje zakażenia wirusami HIV, HCV, HBV.Na analizatorze cobas® 6800 można także wykonać badanie przeglądowe z użyciem testu cobas® DPX, który jest przeznaczony do ilościo-wego badania DNA ludzkiego parvowirusa B19 (B19V) i detekcji RNA wirusa zapalenia wątroby typu A (HAV) w ludzkim osoczu. Opcjonalnym elementem systemu jest cobas® p 680 — w pełni zautomatyzowane urządzenie pipetujące, przeznaczone do pulowania osocza. Aparat ten służy do tworzenia pul podstawowych z osocza pochodzącego z 1, 6, 24, 96 i 480 donacji. Pojedyncza spulowana próbka jest poddawana dalszym badaniom w aparacie cobas® 6800.Celem badań była ocena przydatności testów cobas® MPX i  cobas® DPX wykonywanych na aparacie cobas® 6800 z  zastosowaniem cobas® p 680 w  badaniach przeglądowych w  krwio-dawstwie. W trakcie badań analizowano między innymi czułość wykrywania poszczególnych markerów, zdolność identyfikacji donacji zakażo-nych oraz ryzyko uzyskania wyników fałszywie reaktywnych. Materiał i metodyCzułość analityczną określano, badając w 24 po - wtórzeniach 6 kolejnych rozcieńczeń według międzynarodowych standardów (IS) WHO: HCV 06/102 (31,6–0,1 IU/ml), HIV-1 10/152 (100–0,32 IU/ml) i HBV 10/264 (10–0,03 IU/ml). Dodatko-wo w  24 powtórzeniach badano rozcieńczenia odpowiednich materiałów kontrolnych: IS WHO HIV-2 (08/150) zawierające 31,6–0,32 IU/ml oraz Performance Panel HIV-1 (O) o stężeniu 100–3,16 kopii/ml (Sera Care 0800-0262). Analiza czułości analitycznej testu cobas® DPX obejmowała bada-nie w 24 powtórzeniach każdej próbki z panelu rozcieńczeń materiału referencyjnego WHO geno-typów B19V (09/110) — 6 rozcieńczeń genotypów 146 www.jtm.viamedica.plJournal of Transfusion Medicine 2015, tom 8, nr 41–3 obejmujących stężenia od 31,6 IU/ml do 0,1 IU/ml oraz IS WHO RNA HAV (00/562) o rozcieńczeniach 10–0,03 IU/ml.Poprawność identyfikacji wirusów za pomocą testu cobas® MPX oceniano, badając: 1) prób-ki z wykrytym materiałem genetycznym (HCV i HIV NAT yield oraz seropozytywne HBV) o  znanej wiremii, nierozcieńczone i  rozcieńczo-ne 1:6 (symulacja pul z 6 donacji), 2) 480 próbek (473 ujemne, 7 zawierających materiał genetycz-ny wybranych wirusów) w pulach po 6 donacji i mniejszych (imitacja badań przeglądowych). Jako symulację przebiegu badań przeglądowych w przy-padku testu cobas® DPX zbadano 767 donacji, w tym jedną z wysoką wiremią B19V, w 8 pulach (7 pul po 96 donacji, 1 pula niepełna).WynikiCzułość analityczna testu cobas® MPX na poziomie 95% wykrywalności [LOD] (95-proc. przedział ufności) wynosiła: HBV — 3,97 IU/ml (2,25–9,75); HCV — 7,12 IU/ml (4,40–15,62); HIV — 31,33 IU/ml (17,84–76,80). Gdy analizowano wy-niki rozcieńczeń IS HBV, dobrane tak, by taka sama liczba rozcieńczeń charakteryzowała się stężeniem powyżej i poniżej przewidywanego 95% LOD, czu-łość analityczna wyniosła 2,4 IU/ml (1,54–5,99). Wynik dodatni uzyskano we wszystkich próbkach rozcieńczeń o stężeniach 100–10 kopii/ml oraz 31,6 i 10 IU/ml odpowiednio HIV-1 grupy O i HIV-2.Wartość 95-procentowego limitu detekcji [LOD] (95-proc. przedział ufności) dla testu cobas® DPX wynosiła odpowiednio: 8,70 IU/ml (4,92– –21,69) dla genotypu 1; 37,8 IU/ml (22,24–93,65) dla genotypu 2 i 29,84 IU/ml (19,04–65,60) dla ge-notypu 3 B19V oraz 0,82 (0,49–1,96) dla RNA HAV.HBV (genotyp A, D i H), HCV (genotyp 1b, 3a i 4) i HIV (podtyp B HIV-1) poprawnie zidentyfiko-wano we wszystkich badanych próbkach NAT-do-datnich. Wyniki badań imitujących badania przeglądo-we z zastosowaniem testów cobas® MPX i DPX były w 100% zgodne z oczekiwanymi wynikami, aczkolwiek próbki z  B19V DNA > 109 IU/ml (powyżej zakresu liniowości testu) wymagały 1000-krotnego rozcieńczenia w celu uzyskania wyników ważnych. Częstość wyników fałszywie reaktywnych przy użyciu testu cobas® MPX wynosiła 0,1% (jeden praw-dopodobny przypadek wyniku fałszywie reaktywne-go). Biorąc pod uwagę, że 71% pul było zakażonych, wystąpienie tylko jednego wyżej wymienionego przypadku świadczy o tym, że metody zapobiegania kontaminacjom w ocenianych aparatach i teście są skuteczne. Należy pamiętać, że częstość zakażeń u dawców krwi, którzy będą badani za pomocą oce-nianego testu/systemu, jest bardzo niska (< 1/100). W  trakcie badań prowadzonych z  użyciem cobas® DPX nie obserwowano wyników fałszywie reaktywnych i nieważnych.WnioskiTest cobas® MPX wykazuje czułość i  swoi-stość wymaganą dla testów przeglądowych NAT stosowanych w polskim krwiodawstwie. Prze-prowadzenie badania z wykorzystaniem systemu cobas® 6800 i p 680 umożliwia prawidłową identy-fikację zakażonej donacji bez istotnego ryzyka uzy-skania wyników fałszywie reaktywnych. Określe-nie rodzaju zakażenia nie wymaga przeprowadzenia dodatkowych testów różnicujących.Test cobas® DPX wykonywany na aparacie cobas® 6800 i p 680 pozwala prawidłowo identyfi-kować dawców, których osocze może spowodować przekroczenie dopuszczalnego poziomu 104 IU B19V/ml w puli produkcyjnej w procesie produkcji składników osoczopochodnych. Dodatkowo pozwa-la na wykrycie zakażenia HAV.Już wkrótce planowane jest bardziej szcze-gółowe przedstawienie wyników badań na łamach „Journal of Transfusion Medicine”.Konflikt interesówPraca powstała na podstawie wykładu wygłoszo-nego podczas seminarium „Postępy w badaniach prze-glądowych dawców krwi” (Warszawa, 5–6 październi-ka 2015 r.), organizowanego przez Roche Diagnostics Polska Sp. z o.o. pod nadzorem merytorycznym Instytutu Hematologii i Transfuzjologii w Warszawie.

Wyniki badań walidacyjnych testu cobas® MPX oraz cobas® DPX z wykorzystaniem systemu cobas® 6800 i p 680 firmy Roche. Dane prezentowane podczas seminarium „Postępy w badaniach przeglądowych dawców krwi” (Warszawa, 5–6 października 2015 r.)

https://journals.viamedica.pl/journal_of_transfusion_medicine/article/download/44314/30614

Results of evaluation cobas® MPX assay and cobas® DPX assay performed on system cobas® 6800 and p 680 (Roche). Data presented at the seminar “Advances in blood donor screening” (Warsaw, 5–6 October 2015)

Results of evaluation cobas® MPX assay and cobas® DPX assay performed on system cobas® 6800 and p 680 (Roche). Data presented at the seminar “Advances in blood donor screening” (Warsaw, 5–6 October 2015)

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Via Medica Journals