W N-końcowej części receptora TSH występują epitopy
rozpoznawane przez autoprzeciwciała chorych. Cechą
charakterystyczną tego fragmentu cząsteczki receptora
jest obecność czterech reszt cysteinowych. Proponowano,
że reszty cystein w pozycjach 29 i 41 powiązane są
mostkiem dwusiarczkowym i, że epitop rozpoznawany
przez autoprzeciwciała obejmuje to wiązanie. Obecna
praca miała na celu zbadanie tej możliwości.
Stosowaliśmy syntetyczne peptydy: peptyd zawierający
powyższe, potencjalnie aktywne wiązanie dwusiarczkowe
oraz peptyd podobny, ale nie zawierający wiązania
dwusiarczkowego, a imitujący sekwencję powstałą
w wyniku wytworzenia takiego wiązania. Peptydy te,
oraz peptyd kontrolny o sekwencji nie występującej
w receptorze TSH zostały użyte do immunizacji królików.
Stan czynnościowy tarczyc wszystkich immunizowanych
królików był taki sam. Króliki immunizowane peptydami
pochodnymi receptora wytworzyły przeciwciała
rozpoznające w teście immunoenzymatycznym receptor
TSH z transfekowanych komórek owadzich. Celem
stwierdzenia, czy antypeptydowe przeciwciała królicze
posiadały aktywność autoprzeciwciał stymulujących
zbadano wpływ peptydów oraz wpływ przeciwciał na
wiązanie TSH z receptorem w teście kompetycyjnym
(TRAK) oraz wpływ peptydów i przeciwciał na aktywność
cyklazy adenylanowej w wytwarzających receptor TSH
komórkach jajowych chomika chińskiego.
Stwierdzono, że żaden z peptydów ani żadna z surowic
immunizowanych królików nie hamowała wiązania TSH do receptora w teście TRAK. W przeciwieństwie
do tych negatywnych wyników, w teście stymulacji
cyklazy adenylanowej surowica dwóch z 6 królików
immunizowanych peptydem zawierającym mostek
S-S wykazywała słabą, lecz znamienną statystycznie
aktywność. Otrzymane wyniki wykazały, że receptor
TSH zawiera mostek dwusiarczkowy łączący cysteiny
29-41 oraz że peptyd zawierający ten mostek może
wywołać syntezę przeciwciała stymulującego cyklazę
adenylanową. Peptyd ten obejmuje więc epitop dla
przeciwciał stymulujących.The majority of epitopes for TSH receptor (TSHR)
stimulating autoantibodies are clustered around the Nterminal
region of the TSH receptor. The characteristic
feature of this region is the presence of four cysteine
residues. It was proposed that cysteines in positions 29
and 41 in the receptor are connected by disulfide bonds
and they are the target for receptor stimulating antibodies.
The present study was aimed to check this possibility.
The synthetic peptides: peptide corresponding to the part
of TSHR containing the above 29-41 cysteine bond, the
peptide similar to this peptide but without disulfide bond
and the control peptide, containing sequence absent in the
receptor were used for rabbit immunization. The thyroid
status of all immunized rabbits was the same. Rabbits
immunized with peptides related to TSHR generated
antisera reactive with TSHR in immunoenzymatic assay.
To check specificity of this reaction the influence of the
peptides and the antisera on TSH binding to the receptor
in competitive assay (TRAK) and their influence on
adenylate cyclase activity were studied. It was found
that neither synthetic peptides nor antiserum from any
rabbit influenced TSH binding to the receptor in TRAK. In
contrast low, but significant adenylate cyclase stimulating
activity was noticed for antisera from two of six rabbit
immunized by peptide containing the disulfide bond. We
concluded that such a bond between cysteine residues
29 and 41 are present in TSHR in the site of stimulating
antibodies epitope
