Sequenciamento de DNA Mitocondrial para Avaliação de diferenças genéticas em ovinos (Ovis aries)

Abstract

O sequenciamento de Sanger, ou identificação das bases moleculares do DNA por terminação da cadeia, é um dosmétodos amplamente utilizados para estudos moleculares. O uso da região citocromo b do DNA mitocondrial comomarcador molecular se justifica pela presença de regiões conservadas e variáveis que podem ser sequenciadas e utilizadas em análises filogenéticas em diferentes níveis taxonômicos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a variação do DNAmitocondrial por meio de sequenciamento de Sanger. Para tanto, amostras de tecido sanguíneo de ovinos do grupamentogenético Pantaneiro (n=14), Bergamácia (n=4), Dorper (n=5) e Ile de France (n=5) foram utilizadas para extração deDNA. Logo em seguida as amostras foram submetidas a procedimentos de amplificação, purificação e sequenciamento.As análises estatísticas foram realizadas nos programas BioEdit 7.3.1.0 e MEGA 5.10. A utilização de primers internose externos possibilitou o sequenciamento de 86% da região do citocromo b, o que indicou menor perda de nucleotídeosque acontece na reação de sequenciamento com apenas um par de primers. Os cálculos de diversidade média da regiãosequenciada permitiram observar baixa variação genética na população, evidenciando a natureza conservada do DNAherdado maternalmente. O sequenciamento parcial da região do citocromo b foi capaz de mostrar a variação do DNAmitocondrial em ovinos de 4 raças diferentes e proporcionou gerar dados para a realização de estudos futuros de origeme evolução dos animais.O sequenciamento de Sanger, ou identificação das bases moleculares do DNA por terminação da cadeia, é um dosmétodos amplamente utilizados para estudos moleculares. O uso da região citocromo b do DNA mitocondrial comomarcador molecular se justifica pela presença de regiões conservadas e variáveis que podem ser sequenciadas e utilizadas em análises filogenéticas em diferentes níveis taxonômicos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a variação do DNAmitocondrial por meio de sequenciamento de Sanger. Para tanto, amostras de tecido sanguíneo de ovinos do grupamentogenético Pantaneiro (n=14), Bergamácia (n=4), Dorper (n=5) e Ile de France (n=5) foram utilizadas para extração deDNA. Logo em seguida as amostras foram submetidas a procedimentos de amplificação, purificação e sequenciamento.As análises estatísticas foram realizadas nos programas BioEdit 7.3.1.0 e MEGA 5.10. A utilização de primers internose externos possibilitou o sequenciamento de 86% da região do citocromo b, o que indicou menor perda de nucleotídeosque acontece na reação de sequenciamento com apenas um par de primers. Os cálculos de diversidade média da regiãosequenciada permitiram observar baixa variação genética na população, evidenciando a natureza conservada do DNAherdado maternalmente. O sequenciamento parcial da região do citocromo b foi capaz de mostrar a variação do DNAmitocondrial em ovinos de 4 raças diferentes e proporcionou gerar dados para a realização de estudos futuros de origeme evolução dos animais

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