Papel cooperativo de c-MYC e E6/E7 de duas variantes moleculares do Papilomavírus Humano tipo 16 na proliferação e transformação in vitro de queratinócitos humanos primários

Abstract

As funções das oncoproteínas E6 e E7 do Papilomavírus Humano tipo 16 (HPV-16) na progressão de células epiteliais imortalizadas para tumores invasivos não são totalmente compreendidas. Aqui, estabelecemos uma nova ligação entre E6 e E7 de duas variantes moleculares de HPV-16 (AA e E-350G) e c-MYC, em relação à cooperação na promoção da transformação maligna de queratinócitos humano primários de prepúcio de recém-nascido (PHK). Nosso objetivo foi estudar os efeitos sinérgicos de E6/E7 e c-MYC na proliferação e no potencial de transformação in vitro de PHKs. Avaliou-se a proliferação celular através da expressão proteica do Antígeno Nuclear de Células Proliferantes (PCNA). Também avaliamos a capacidade de transformação, in vitro, dos PHKs através de dois ensaios complementares. Observamos que E-350G-c-MYC PHKs exibiram um aumento discreto na expressão de PCNA e formaram significativamente mais colônias tanto nos ensaios de soft-ágar quanto nos ensaios em placas de cultura de baixa adesão. No geral, concluímos que a variante E-350G co-transfectada com c-MYC pode promover a transformação celular maligna com eficiência maior do que a variante AA-c-MYC. As propriedades oncogênicas exibidas pela variante E-350G permitem entender em maior detalhe os mecanismos que podem levar à neoplasia cervical humana, dada a maior frequência de sua ocorrência na progressão de lesões precursoras de alto grau para carcinomas invasivos.The roles of E6 and E7 oncoproteins of Human Papillomavirus type 16 (HPV-16) in the progression of immortalized epithelial cells to invasive tumors are not fully understood. Here, we establish a novel link between E6 and E7 of two molecular variants of HPV-16 (AA and E-350G), and c-MYC, regarding the cooperation in promoting malignant transformation of primary human foreskin keratinocytes (PHK). We aimed to study the synergistic effects of E6/E7 and c-MYC upon proliferation, and the in vitro transformation potential of PHK. We evaluated cellular proliferation through the expression of the Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA) protein and colony formation abilities using soft agar and low attachment plates. We observed that E-350G-c-MYC PHKs exhibited discrete higher PCNA levels and formed significantly more colonies in both soft-agar and when growth in low-adhesion culture plates. Overall, we concluded that the E-350G variant co-transfected with c-MYC might promote malignant cellular transformation with a better efficiency than the AA-c-MYC counterpart. The enhanced oncogenic properties exhibited by the E-350G-c-MYC variant offer insights into mechanisms that may operate in human cervical neoplasia, given the higher frequency of its occurrence in the progression of high-grade precursor lesions to invasive carcinomas