Uso del ensayo de inhibición de migración larval para la evaluación de resistencia antihelmíntica de novillas lecheras en Puerto Rico

Abstract

Ivermectin (IVM) resistance of Cooperia spp. in dairy heifers from Puerto Rico was evaluated using the larval migration inhibition assay (LMIA). In eight of the farms where anthelmintic resistance had previously been evaluated using a fecal egg count reduction test (FECRT), third stage larvae (L3) were recovered from fecal cultures prior to the administration of IVM treatment. The effective concentration at which 50% of larval migration is inhibited (EC50) was determined in susceptible and resistant Cooperia spp. isolates from one farm. The susceptible and resistant isolates had an EC50 of 0.7224 uM and an EC50 of 7.0778 uM, respectively. This indicates that on average, larvae from the resistant isolate are 10X more resistant than those from the susceptible isolates. However, the LMIA was unable to discriminate consistently between susceptible and resistant larvae obtained from dairy farms evaluated. In one case, an EC50 value of 0.7263 uM, which is close to that of the susceptible isolate, did not agree with the FECR result of -136.19% documented on this farm. In two additional instances the assay was unable to discriminate between susceptible and resistant isolates. Indeed LMIA EC50 values obtained from some resistant isolates were lower than the EC50 value from susceptible isolates, whereas their FECRT results indicated that resistance to IVM was present. Possibly, the FECRT could have given a false positive for macrocyclic lactones resistance at these two farms. Therefore, more studies are needed to validate the effectiveness of the LMIA to detect anthelmintic resistance to macrocyclic lactones in Cooperia spp. larvae isolated from bovine fecal field samples.La resistencia antihelmíntica de ivermectina (IVM) en Cooperia spp. de novillas lecheras de Puerto Rico se evaluó mediante el ensayo de inhibición de la migración de larvas (LMIA, por sus siglas en inglés). La tercera etapa larval (L3) se recuperó a partir de cultivos fecales pre tratamiento en ocho fincas donde se evaluó previamente la resistencia antihemíntica con el uso de una prueba de reducción del conteo de huevos fecales (FECRT, por sus siglas en inglés). La concentración efectiva donde se inhibe el 50% de la migración de las larvas (EC50) se obtuvo a partir de cepas susceptibles y resistentes de Cooperia spp. aisladas en una de las fincas. Las larvas susceptibles se caracterizaron por un EC50 de 0.7224 uM y las resistentes por un EC50 de 7.0778 uM. Este resultado indica que en promedio las larvas del aislado resistente son 10X más resistentes que las del aislado susceptible. Sin embargo, el LMIA no fue capaz de discriminar consistentemente entre las larvas susceptibles y resistentes obtenidas de las fincas evaluadas. En uno de los casos, un valor de EC50 de 0.7263 uM, cercano al valor obtenido con el aislado susceptible, no coincidía con el resultado de FECR de -136.19% documentado en esa finca. En dos ocasiones más la prueba no pudo discriminar entre los aislados resistentes y susceptibles. De hecho, los valores de EC50 de LMIA obtenidos de algunos aislados resistentes eran menores que los valores de EC50 de los aislados susceptibles, aunque sus resultados de FECRT indicaran que había resistencia a IVM. Posiblemente, el FECRT dio resultados falso positivos debido a la presencia de resistencia de lactonas macrocíclicas en esas dos fincas. Por lo tanto, se requieren más estudios para validar la efectividad de LMIA para detectar la resistencia antihelmíntica a lactonas macrocíclicas en larvas de Cooperia spp. aisladas de muestras fecales de bovinos