From the roots of Pulsatilla chinensis (BUNGE) REGEL (Ranunculaceae),hederagonic acid (1) was isolated and identified on the basis of spectral data.Compound 1 has been isolated from the roots of this plant for the first time.Some correlations in the HMBC and NOESY spectra of compound 1 suggested the existence of a conformational equilibrium on the C23-hydroxyl group

Hoshino Asami

Kikuchi Masao

Yaoita Yasunori

キクチ マサオ

ホシノ アサミ

ヤオイタ ヤスノリ

八百板 康範

星野 麻美

菊地 正雄

English

Tohoku Medical and Pharmaceutical University Academic Repository / 東北医科薬科大学学術リポジトリ

ハクトウオウは，ヒロハオキナグサPulsatilla chinensis
（Bunge）Regel（キンポウゲ科，Ranunculaceae）の
根を乾燥したものであり，抗アメーバ原虫作用や抗
トリコモナス作用を有することが知られている．1）
ハクトウオウの化学成分に関してはこれまでに，オ
レアナン型トリテルペンサポニンについての報告
がある．1−5） 本論文において著者らは，ハクトウオ
ウの低極性成分について検討を行い，オレアナン型
トリテルペノイドの hederagonic acid（1）を単離，
同定したので報告する．また，立体配座についても
検討を行ったので併せて報告する．
化合物 1 は，高分解能（HR)- 電子イオン化（ei)-Ms
から C30H46o4 の分子式を有することが判明した．
ei-Ms においては m/z 248 に 12 位に二重結合を有
するトリテルペノイドに特徴的なフラグメントイ
オンピークが認められる．6）  1H-nMR スペクトルに
おいては，6 個の三級メチル基［δH 0.83（3H, s, H3-
26), 0.90（3H, s, H3-29), 0.93（3H, s, H3-30), 1.01（3H,
s, H3-24), 1.14, 1.15（each 3H, s, H3-25, H3-27）］，水酸
基の付け根のメチレンプロトン［δH 3.42（1H, d, J＝
11.4 Hz, H-23a), 3.65(1H, d, J＝11.4 Hz, H-23b）］及び
三置換二重結合［δH 5.30（1H, dd, J＝3.7, 3.3 Hz, H-
12）］に基づくシグナルが認められる．また，13C-
nMR スペクトルにおいては 30 本のシグナルが観
察され，そのうち，δC 182.2（C-28）及び 219.1（C-
3）にカルボニル炭素のシグナルが認められる．更
に，各種二次元 nMR スペクトルを検討することに
より本化合物は hederagonic acid と推定されたの
で，文献値 7,8）（ei-Ms，1H- 及び 13C-nMR スペクト
ル）との比較により同定した（Chart 1）．本化合物
は既にスイカズラ科（Caprifoliaceae）の植物である
Viburnum erubescens の全草より報告されている
が，9）ハクトウオウより単離されたのは今回が初め
てである．
化合物 1 の同定に際して 1H-detected heteronuclear
multiple bond correlation（HMBC）スペクトルの測
定を行ったところ，23 位のメチレン基の水素に関し
て，23a の水素から 24 位のメチル基の炭素に相関が
認められるが，23b の水素については相関が認めら
れないことを確認した．また，23b の水素は 5 位の炭
素に相関を示すが，23a の水素は相関を示さないこ
とも確認された．この相関の差異は 23 位の水酸基
に関する配座異性体間の相互変換によるものと推
定されたので，その立体配座について検討を行っ
た．Zeng らは HMBC スペクトルにおいて観察され
る 3JC,H に基づく相関は 3JH,H と同様に Karplus 型の
二面角依存性を示し，三結合を隔てた水素と炭素と
東北薬科大学研究誌，56，37−39（2009） 37
Journal of tohoku Pharmaceutical university，56，37−39（2009）
ハクトウオウの化学成分（第１報）Hederagonic Acid の同定並びに立体配座について
八百板康範，星野　麻美，菊地　正雄
Constituents of the Roots of Pulsatilla chinensis（Bunge）Regel.Ⅰ.
Identiﬁcation and Conformation of Hederagonic Acid
Yasunori Yaoita, asami HosHino, and Masao KiKuCHi
（Received november 20, 2009）
From the roots of Pulsatilla chinensis（Bunge）Regel（Ranunculaceae), hederagonic acid（1）was isolated and
identiﬁed on the basis of spectral data. Compound 1 has been isolated from the roots of this plant for the ﬁrst time.
some correlations in the HMBC and noesY spectra of compound 1 suggested the existence of a conformational
equilibrium on the C23-hydroxyl group.
Key words ── Pulsatilla chinensis; Ranunculaceae; triterpenoid; conformation
Chart 1
の間の二面角が 180°のときに相関が認められ，60°
のときは相関が認められないことに基づく立体配
座解析法を報告している．10） これを適用すると，化
合物 1 は 23 位の水酸基と 24 位のメチル基がゴー
シュ形（1a）及びトランス形（1b）をとる配座異性
体の平衡混合物として存在することが明らかと
なった（Fig. 1）．このことは nuclear overhauser
eﬀect correlation spectroscopy（noesY）スペクト
ルの結果からも支持される（Fig. 2）．この配座平衡
には 3 位のカルボニル基と 23 位の水酸基との間の
分子内水素結合の関与が示唆されるので，11）  1a 及
び 1b の配座について半経験的分子軌道法（PM3）に
より 3 位のカルボニル基の酸素原子と 23 位の水酸
基の水素原子間の距離を計算した．12） その結果，1a
については 1.883Å，1b については 2.063Åの値が得
られ，これらは分子内水素結合が形成可能な距離
（1.4Å～2.1Å）11）であることを確認した（Fig. 3）．
以上，ハクトウオウの成分について検討を行い，
オレアナン型トリテルペノイドの hederagonic acid
（1）を単離，同定した．また，化合物 1 の立体配座
についても検討を行い，23 位の水酸基に関する平衡
混合物の存在を明らかにした．
実　験　の　部
HR-ei-Ms 及び ei-Ms は日本電子 JMs-700 型を用
いて測定した．nMR スペクトルは日本電子 JnM-la
600 型を使用し，内部標準物質に tetramethylsilane
 38                                                   八百板康範，星野　麻美，菊地　正雄
Fig. 1.  newman Projections along C4−C23 Bond of Compound 1 Depicting two Conformers for 1a and 1b
Fig. 2.  noe interactions for Conformers 1a and 1b of Compound 1
Fig. 3.  Distance of intramolecular Hydrogen Bond Between C3-Carbonyl group and C23-Hydroxyl group in Conformers
1a and 1b of Compound 1 Calculated by PM3
（tMs）を用いて測定した（略語：s＝singlet, d＝
doublet, dd＝double doublet, ddd＝double double
doublet, m＝multiplet）．化学シフトは δ値（ppm）
で示し，結合定数（J）は Hz で表した．シリカゲル
カラムクロマトグラフィーには充填剤として
Kieselgel 60（Merck, 230−400 mesh）を使用した．
分取 HPlC には，東ソー製装置［ポンプ，CCPs; 検
出器，Ri-8020; カラム恒温槽，Co-8020; カラム，
tsKgel oDs-120t（7.8 mm i.d.×30 cm); カラム温
度，40℃］を使用した．
抽出及び分離 ウチダ和漢薬より購入したハク
トウオウ（2.0 kg）を MeoH で抽出し，MeoH エキ
ス（209.7 g）を得た．これを水に懸濁し，CHCl3 で
抽出を行い，CHCl3 可溶部（12.5 g）を得た．CHCl3
エキスをシリカゲルカラムクロマトグラフィー［n-
hexane−acoet（7 : 3−1 : 7), acoet, MeoH］に付
して分画を行い，フラクション（fr.）1−32 を得た．
このうちの fr. 12 を分取 HPlC［mobile phase,
MeoH−H2o（9 : 1）containing 0.1% CH3CooH; ﬂow
rate, 1.5 ml/min］に付し，化合物 1（10.0 mg）を単
離した．
Hederagonic Acid（1）無晶形粉末．ei-Ms m/z
（%): 470（M＋, 1）, 248（100), 233（10), 203（94). HR-
ei-Ms m/z : 470.3395（M＋, Calcd for C30H46o4;
470.3396). 1H-nMR（600 MHz, CDCl3）δ: 0.83（3H,
s, H3-26), 0.90（3H, s, H3-29), 0.93（3H, s, H3-30), 1.01
（3H, s, H3-24), 1.14, 1.15（each 3H, s, H3-25, H3-27),
1.41（1H, m, H-6α), 1.62（1H, dd, J ＝8.1, 3.7 Hz, H-5),
2.27（1H, ddd, J＝16.5, 5.1, 2.6 Hz, H-2α), 2.63（1H,
ddd, J ＝16.5, 13.6, 6.6 Hz, H-2β), 2.84（1H, dd, J＝13.9,
4.4 Hz, H-18), 3.42（1H, d, J＝11.4 Hz, H-23a), 3.65
（1H, d, J＝11.4 Hz, H-23b), 5.30（1H, dd, J＝3.7, 3.3
Hz, H-12). 13C-nMR（150 MHz, CDCl3）δ: 15.2（C-
25), 16.8（C-26), 17.1（C-24), 19.1（C-6), 23.0（C-16), 
23.49（C-11), 23.54（C-30), 25.9（C-27), 27.7（C-15),
30.7（C-20), 32.1（C-22), 32.4（C-7), 33.0（C-29), 33.8
（C-21), 35.2（C-2), 36.6（C-10), 38.8（C-1), 39.3（C-8), 
41.1（C-18), 41.8（C-14), 45.8（C-19), 46.5（C-17), 46.8
（C-9), 49.2（C-5), 52.4（C-4), 66.9（C-23), 122.2（C-12),
143.8（C-13), 182.2（C-28), 219.1（C-3）．
謝辞 本研究にあたり，Ms 及び nMR スペク
トルを測定していただいた本学中央機器センター
の方々に深謝いたします．
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12）semiempirical molecular orbital calculations by the
PM3 method were performed with MoPaC program
implemented by Cambridge software Chem3D ultra
（Version 7）using default parameters.
                       ハクトウオウの化学成分（第１報）Hederagonic acid の同定並びに立体配座について 39


ハクトウオウの化学成分(第1報) Hederagonic Acidの同定並びに立体配座について

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ハクトウオウの化学成分(第1報) Hederagonic Acidの同定並びに立体配座について

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