International audienceThe members of the annexin family of calcium-and phospholipid-binding proteins participate in different cellular processes. Annexin A2 binds to S100A10 forming a functional heterotetrameric protein that has been involved in many cellular functions such as exocytosis, endocytosis, cell junction formation and actin cytoskeleton dynamics. Herein, we studied annexin A2 cellular movements and looked for its partners during epithelial cell differentiation. By using immunofluorescence, mass spectrometry and western blot analyses after S100A10 affinity column separation, we identified several annexin A2-S100A10 partner candidates. The association of putative annexin A2-S100A10 partner candidates obtained by MS after column affinity was validated by immunofluorescence and sucrose density gradient separation. The results show that three proteins were clearly associated to AnxA2: E-cadherin, actin and caveolin 1. Overall the data show that annexin A2 is able to associate to molecular complexes containing actin, caveolin 1 and flotillin 2 before epithelial differentiation and to complexes containing E-Cadherin, actin and caveolin 1, but not flotillin 2 after cell differentiation. The results indicate that actin, caveolin 1 and E-cadherin are the principal 2 protein partners of annexin A2 in epithelial cells and that the serine phosphorylation of the N-terminal domain does not play an essential role during epithelial cell differentiation.Les membres de la famille des annexines, des protéines liant le calcium et les phospholipides, participent à différentsprocessus cellulaires. L’annexine A2 se lie à S100A10, formant une protéine hétérotétramérique fonctionnelle qui a été impliquéedans plusieurs fonctions cellulaires telles que l’exocytose, l’endocytose, la formation des jonctions cellulaires et la dynamique ducytosquelette. Les auteurs ont étudié ici les mouvements cellulaires de l’annexine A2 et recherché ses partenaires durant ladifférenciation des cellules épithéliales. À l’aide de l’immunofluorescence, de la spectrométrie de masse et des analyses detransferts « western » après séparation sur une colonne d’affinité S100A10, ils ont identifié plusieurs candidats partenaires del’annexine A2–S100A10. L’association de candidats partenaires présumés de l’annexine A2–S100A10 obtenus par SM après lacolonne d’affinité a été validée par immunofluorescence et séparation sur un gradient de densité de sucrose. Les résultatsmontrent que trois protéines sont clairement associées à l’annexine A2 : la E-cadhérine, l’actine et la cavéoline 1. Globalement,les données montrent que l’annexine A2 peut s’associer à des complexes moléculaires comprenant l’actine, la cavéoline et laflotilline 2 avant la différenciation épithéliale et à des complexes comprenant la E-cadhérine, l’actine et la cavéoline 1, mais pasla flotilline 2, après la différenciation cellulaire. Les résultats indiquent que l’actine, la cavéoline et la E-cadhérine constituent lesprincipaux partenaires protéiques de l’annexine A2 dans les cellules épithéliales et la phosphorylation des sérines du domaineN-terminal ne joue pas un rôle essentiel durant la différenciation des cellules épithéliales
