Navarro Baucis, Alexandre

Universitat Autònoma de Barcelona. Facultat de Biociències

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El sistema Sleeping Beauty y la terapia génicaAlexandre Navarro Baucis11Universitat Autònoma de Barcelona, Barcelona, SpainIntroducciónActualmente la terapia génica se ha convertido en una de las técnicas terapéuticas más prometedoras para la curación de enfermedades. Esta técnica se basa en la introducción de genes terapéuticos en el paciente mediante vectores que pueden ser víricos o no víricos para intentar restablecer el fenotiponormal. Entre los vectores víricos destacan los Adenovirus, los Virus Adeno-Asociados y los retrovirus. Entre los vectores no víricos destaca el ADN desnudo, los plásmidos y los transposones. En el presente trabajo se va a exponer un caso concreto de terapia génica ex vivo mediante transposones, en concretomediante el sistema llamado Sleeping Beauty. Dicho sistema permite integrar un gen terapéutico, en este caso el gen FAN-C, en el genoma de un individuo afectado por anemia de Fanconi tipo C manteniendo de esa forma la expresión continuada del gen FAN-C a lo largo del tiempo.MetodologíaConstrucción del sistema Sleeping Beauty: Elsistema, en configuración trans (formado por dosplásmidos) será introducido mediante electroporaciónen el interior de las células del paciente. El plásmidoque contiene la transposasa SB100X (plásmido pCMV-SB100) se transforma junto con el plásmidopKT2/GECPF, que contiene el gen terapéutico FAN-C iel gen de la Proteína Verde Fluorescente (GFP), ambosgenes controlados por un promotor bidireccional(EF1α-CLE/PGK).2Electroporación de las célulasdel paciente: Mediante descargaseléctricas se forman poros en lamembrana de las células por los quepueden pasar los plásmidos delsistema Sleeping Beauty.Resultados Conclusiones31Integración del gen FAN-C en el genoma de los pacientes con anemia de Fanconi: Después de hacer laelectroporación en las células de los pacientes para introducir los dos vectores que componen el sistema Sleeping Beauty, seespera que éstas sinteticen la proteína funcional. La transposasa codificada por el plásmido pCMV-SB100 reconoce lasregiones ITR que flanquean el gen de interés (FAN-C) y permite la escisión y la posterior integración del gen en el genoma delhuésped.44Medida del grado de expresión deltransgén: la construcción que se ha integradoen el genoma contiene el gen de la proteínaverde fluorescente, la cual va indicar si seexpresa la proteína y por lo tanto también seexpresará, supuestamente, la proteína FAN-C.Posteriormente se mide la viabilidad de lascélulas en un medio con Mitomicina-C.BibliografíaHyland, K. et al. Sleeping Beauty-mediated correction of Fanconi anemia type C. Journal of gene medicine, 2011; 13: 462-469Marta Swierczek. et al. The Sleeping Beauty transposon system for clinical applications. Expert Opin. Biol. Ther. (2012) 12(2):139-153A y B: Tanto en el paciente A como en el B, las células transformadas muestran una expresión de GFP de hasta el 90% del total de las células en presencia de MitomicinaC, indicando que existe expresión del gen FAN-C (las células presentan resistencia a la Mitomicina-C). C: Mediante el estudio de la viabilidad celular se comprueba que lascélulas han restaurado el fenotipo normal, viabilidad del 70-90% frente a una viabilidad del 20-30% en células FAN-C.● El gen FAN-C terapéutico se integra satisfactoriamente en el genoma de células de pacientes con Anemia de Fanconi tipo C.● El sistema Sleeping Beauty es un vector no vírico eficaz en terapia génica ex vivo contra la Anemia de Fanconi tipo C.● Lo económico de su fabricación, la sencillez de su diseño y la baja respuesta inmune que desatan en el huésped hacen delsistema Sleeping Beauty un vector muy indicado para la terapia génica en el futuro, sustituyendo (o complementando) a losvectores víricos tradicionales.● Actualmente, sin embargo, la mayoría de estudios clínicos se realizan con vectores víricos debido a su alta tasa de eficacia.

El sistema Sleeping Beauty y la terapia génica

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